将CRISPR-Cas12a与LAMP、RPA等各种等温扩增(IA)技术相结合的检测法可以实现对核酸的超灵敏检测,并且具有价格合理、携带方便、快速等优势,非常适合在现场使用。如运用CRISPR-Cas12a技术所研发的核酸试纸条已实现布鲁氏菌感染菌株中野毒株和S2疫苗株的鉴别诊断,可用于...
7. CAS12a对DNA的靶向识别主要依赖crRNA,通过更换不同的crRNA,可以实现对不同DNA序列的靶向。crRNA的设计直接决定了CAS12a系统的靶向特异性。CAS12a的活化与DNA靶向机制：1. CAS12a处于非活性状态时,其NUC结构域被PI结构域阻塞,无法发挥催化活性。crRNA的结合可以解除PI结构域的抑制,激活CAS12a。2. crRNA先通过其重...
研究人员所得到的R-loop中间结构表明，REC2结构域在R-loop形成过程中具有显著的灵活性，这种灵活性允许R-loop延伸，但在形成过程中延迟了与Cas12a蛋白的接触。这揭示了在R-loop形成初期，Cas12a蛋白并不稳定中间体，从而允许R-loop的可逆性和对错误DNA序列的快速解离。此外，研究人员通过cryo-EM观察到在中间R-loop...
CRISPR/Cas12属于2类V型RNA引导的核酸内切酶。该蛋白家族中研究较多是Cas12a核酸酶，目前最常用的Cas12a蛋白来自氨基酸球菌属的BV3L6菌株和毛螺科细菌(LbCas12a)。Cas12a蛋白已被广泛应用于包括细菌、酵母、植物和人类细胞在内的多个物种。Cas12a蛋白由向导RNA引导剪切带有特异性序列的双链dna(dsDNA)。与Cas9蛋白一...
三、Cas12a与Cas9的区别 1.crRNA 对于Cas9，当外源核酸入侵后，细菌会转录出tracrRNA，同时Cas9蛋白被转录翻译，而Cas1、Cas2和Csn2会附着在Cas9蛋白上；然后CRISPR序列在前导区的调控下转录生成Pre-crRNA，Pre-crRNA与tracrRNA通过碱基互补配对形成双链RNA，同时与Cas9蛋白组装形成复合体，最终根据入侵核酸的类型选取...
1、本研究发现了Cas12a可以识别split靶点,从而激活反式切割活性。 2、本研究创新性地提出了基于Cas12a的RNA直检平台:SAHARA,不需反转录,不需扩增。 3、本研究发现AsCas12a本身就可以直接检测RNA靶标(图2 c),那么是否可以筛选AsCas12a的高同源性蛋白或者直接对AsCas12a进行改造或体系优化,从而实现更简单、更直接...
摘要:CRISPR/Cas系统是近年来被广泛应用于基因组编辑的一项新兴技术,其中CRISPR/Cas12a技术由于具有独特的优势,受到越来越多的关注 基因组编辑(genomeediting)是对细胞内的目标遗传物质进行特定改造的一种技术,包括DNA删除、替换、插入、易位、点突变等。基因组编辑技术在分子生物学领域发挥着重要作用,通过对目的基因进行...
Cas12a主要特点 1.来源: cas12a来源于微生物的CRISPR-Cas免疫系统，是其中一种type V CRISPR系统中的效应分子。2. 结构: cas12a是一个多功能蛋白，包含RNA结合域、核酸酶域和DNA结合域。其中核酸酶域具有DNA内切酶活性，可以在激活后非特异性地切割DNA。3. 指导RNA: cas12a需要与crRNA结合才具有活性，crRNA与其...
最近，美国爱荷华州立大学的研究人员在Nuleic Acids Research 期刊上发表名为CRISPR-Cas12a exhibits metal-dependent specificity switching的论文，该研究揭示了Cas12a表现出金属依赖的特异性转换的结果。Cas12a的特异性是由crRNA和DNA靶标之间的互补性、DNA靶标旁边的原间隔短回文序列邻近基序（protospacer adjacent motif...
Cas12a属于第2大类V型CRISPR/Cas核酸酶,与广泛使用的Cas9(第2大类II型)核酸酶不同,它作为基因组编辑工具有以下几个特性。(1) Cas12a核酸酶与单一CRISPR RNA (crRNA)结合,不需要反式激活CRISPR RNA (tracrRNA),故而Cas12a的crRNA ...