慢病毒的生产是一个持续几天的细胞培养过程,将病毒载体转移到培养基中。主要有贴壁和悬浮两种培养方式。小规模研究可以选择贴壁培养,但大规模生产需要悬浮培养。 慢病毒的大规模生产常用HEK293T细胞系,可以在没有贴壁的情况下迅速悬浮生长。将包装细胞在培养基中传代数次,达到一定数量后,用病毒包装质粒和目的基因载体...
检查特定于细胞系的条件非常重要,否则冷冻的种子细胞在复苏和再培养时可能不会产生活细胞。 为了从液氮储存中恢复细胞系,将冷冻的小瓶在便携式液氮容器或干冰中运输到细胞培养区域。冷冻小管中的DMSO一旦融化,会对细胞产生毒性,因此,为确保高细胞活力,必须在37°C水浴中迅速融化细胞,并立即将其转移到装有预热培养基的...
生产CAR-T时所用的T细胞富集手段一般是单抗磁珠富集法,T细胞通过CD4/CD8特异性抗体或者表面标记偶联磁珠进行分离,然后加入CD3/CD28单克隆抗体磁珠或人工抗原提呈细胞等对细胞培养基中的T细胞进行激活,这其实是模拟正常身体环境中树状细胞对休眠T细胞的刺激,并使其...
生产CAR-T时所用的T细胞富集手段一般是单抗磁珠富集法，T细胞通过CD4/CD8特异性抗体或者表面标记偶联磁珠进行分离，然后加入CD3/CD28单克隆抗体磁珠或人工抗原提呈细胞等对细胞培养基中的T细胞进行激活，这其实是模拟正常身体环境中树状细胞对休眠T细胞的刺激，并使其迅速活化。因为仅有活化后的T细胞能够快速分裂，且T细胞...
LV生产的上游工艺主要包括细胞培养(分为悬浮/贴壁培养等)和病毒包装;下游工艺一般涉及澄清、纯化、过滤、浓缩、除菌等步骤。与细胞分离步骤一样,载体的无菌性至关重要,因为最终的CAR-T细胞产物无法通过过滤进行灭菌。 ▲Oxford BioMedica为诺华Kymriah代工的慢病毒制造流程(图片来源:Molecular Therapy ...
CAR-T生产制备流程复杂,耗时较长,包括单采白细胞及细胞清洗、富集T细胞并激活、基因传递/转染、细胞培养、冷冻及运输等过程,最终输回患者体内。已披露的临床试验CAR-T的从收集到回输的时间大多在10- 25天左右,已上市的Kymriah 制备耗时为22天,Yescarta则为17天。其中获取并激活T细胞耗时1天,载体转染耗时约2天,扩...
1、严格按照文件体系要求进行CAR-T细胞的制备(试剂配制、细胞培养、细胞收集、细胞冻存等)。 2、记录并处理实验数据;日常记录表单的填写。 3、参与实验室其他细胞培养工作(造血干细胞、其他免疫细胞等)。 4、细胞库的日常管理和维护。 5、对实验室细胞培养试剂耗材进行统计、盘点。完成实验室日常清洁,做好实验室仪器...
之前,对干细胞向 T 细胞的分化,大多需要借助一种小鼠来源的基质支持细胞。而且,所得到的 T 细胞其成熟度和功能性,都和外周 T 细胞有显著的差异。 从一开始,该团队就很明确研究目标:即研发出适合临床转化的细胞培养和分化体系。因此,他们摒弃了对小鼠来源基质支持细胞的使用。
通过生物反应器等细胞培养设备对T细胞进行扩增培养。患者身上只能分离少量的淋巴细胞,大多数有白细胞减少症和其他并发症,需要将适宜的T淋巴细胞扩增以达到治疗目的。有许多患者最终无法接受CAR-T治疗,原因就在于这些患者的T细胞无法在体外充分扩增,未达到目标剂量。CAR-T细胞扩增需要一个封闭、自动化和受控的扩增平台。细胞...
目前用于CAR-T细胞培养的生物反应器或系统主要有Wave 反应器、G-Rex及CliniMACS Prodigy。综合实际情况考虑,CliniMACS Prodigy可以完成细胞的制备,富集,刺激,转导,扩增,最终收集和采样,是最适合用于临床试验中T细胞的制备。当细胞扩增完成,细胞培养体积至5L,必须将细...