将细胞培养液吸出,用PBS清洗2次,加入0.25%胰蛋白酶-0.02% EDTA进行消化。 3.取细胞适量接种到培养瓶继续培养或进行铺板操作。 转运实验 1. 接种细胞:用培养基将Caco-2细胞浓度调整至1.0-1.5×105/ml,在Transwell板的基底侧(Basolateral side,B)加入1.5 ml MEM完全培养...
Caco-2细胞转运实验详细讲解 Caco-2 细胞转运实验 ⼈结肠癌细胞系Caco-2是⽤来研究药物经肠吸收的常⽤模型。Caco-2细胞体外培养条件下可⾃发进⾏上⽪样分化,形成与⼩肠上⽪细胞相同的微绒⽑结构和紧密连接,形态学、标志酶的功能表达及渗透特征都与⼩肠柱状上⽪细胞很相似。在Caco-2细胞中,...
Caco-2细胞模型是将Caco-2细胞接种于半透膜(多为聚碳酸酯多孔膜)上,待细胞生长分化为完整的细胞单层(一般21~24天),即可模拟人体肠道上皮吸收屏障,用于药物通透性实验(图11-5)。 近来研究发现,犬肾上皮细胞系MDCKⅡ和Caco-2细胞在许多药物的转运上具有很好的相关性,且其培养周期较短(3~5天)即可形成完整细胞单...
1. 实验准备 细胞准备: 细胞系:获取Caco-2细胞株。 培养基:使用适合的培养基,如Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) 添加10%胎牛血清(FBS)和1%抗生素 培养器具:无菌的培养瓶、细胞培养板(通常为Transwell® 24孔板)。 培养条件: 培养环境:37°C,5% CO₂。 2. 细胞接种与培养 细胞接种: 准备细胞悬...
1、Caco-2 细胞转运实验人结肠癌细胞系Caco-2是用来研究药物经肠吸收的常用模型。Caco-2细胞体外培养条件下可自发进行上皮样分化,形成与小肠上皮细胞相同的微绒毛结构和紧密连接,形态学、标志酶的功能表达及渗透特征都与小肠柱状上皮细胞很相似。在Caco-2细胞中,主要药物转运体如寡肽转运体PEPTI,P-糖蛋白MDRI、多...
Caco-2细胞模型是将Caco-2细胞接种于半透膜(多为聚碳酸酯多孔膜)上,待细胞生长分化为完整的细胞单层(一般21~24天),即可模拟人体肠道上皮吸收屏障,用于药物通透性实验(图11-5)。 近来研究发现,犬肾上皮细胞系MDCK Ⅱ和Caco-2细胞在许多药物的转运上具有很好的相关性,且其培养周期较短(3~5天)即可形成完整细胞...
Caco-2 细胞转运模型是被国外制药企业以及实验室应用的模拟肠道吸收的药物筛选模 型,已广泛应用于药物在小肠吸收的评价和转运机制研究中。Caco-2 细胞的结构和功能类似 于人小肠上皮细胞,含有与小肠刷状边缘上皮相关的酶系。 与正常的成熟小肠上皮细胞在体外培育过程中出现的逆向分化不同,Caco-2 细胞在多孔可渗 ...
目前,制药行业正利用Caco-2细胞开展渗透性分析,以估计候选药物穿过小肠上皮的能力。Caco-2细胞模型的具体应用包括:研究口服药物是从A到B方向还是从B到A方向转运,并明确药物吸收是被动扩散还是主动转运,为给药方案提供依据。 当然,我们首先要培养Caco-2细胞。细胞通常被接种到Transwell或Snapwell小室中,这些小室分为上下...
细胞按50000个·cm-2接种到Millicell膜上,接种后每2d换液1次,1周后每天换液,培养至21d。跨膜电阻>320Ψ·cm-2和荧光黄2h通透量小于1%的膜用于药物转运实验。2.2dmso溶液精密称定TMS100.00mg于10mL量瓶中,加入DMSO溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。实验前用相应pH值的Hank′s缓冲液稀释至所需浓度,其中DMSO最终...
Caco-2细胞在聚碳酸酯膜上培养21天后可自发分化为小肠微绒毛上皮细胞,并能稳定表达小肠中的一些主要吸收转运蛋白、外排转运蛋白和代谢酶。为了更好地模拟生理环境,禁食状态的人肠液(Fassif)用于供体侧,接收缓冲液中加入1%牛血清白蛋白(BSA)。BSA不仅提供药物膜转运的下沉条件,还能减少药物在聚碳酸...