TBST 是Tris缓冲液,也是实验室常用的抗体稀释液,效价高的抗体会看到漂亮的条带,效价差的一抗或多抗,会清晰反映出非特异性结合条带,背景高,不能起到降低背景的作用。 3、PBST PBS是磷酸盐缓冲液,不能用来稀释碱性磷酸酶(AP)标记的抗体,因为磷酸盐会抑制碱性磷酸酶活性。 4、BSA 牛血清白蛋白(BSA) 是牛血清...
Q2、如果不是用biotin-avidin系统的话,用5%脱脂奶粉做封闭液就可以了,廉价,效果也很好。 Q3、封闭液一般是用5%的BSA或者是用5%的脱脂奶粉,溶剂一般使用TBST。做实验的时候,我一直强调这样的一个原理,那就是在了解原理的基础之上,我们完全可以不拘泥于书本,进行创造...
但因容易发霉变质,每次使用,需要更改新的抗体,不利于抗体的回收和保存;加上遇到溶解不充分和洗涤不干净,容易增加背景、拮抗抗原抗体结合,且不能用于磷酸化蛋白。 2、TBST TBST 是Tris缓冲液,也是实验室常用的抗体稀释液,效价高的抗体会看到漂亮的条带,效价差的一抗或多抗,会清晰反映出非特异性结合条带,背景高,...
网络上流传的磷酸化抗体不适于用牛奶封闭的说法是没有科学依据的。这一误区的出现可能是由于实验者使用了非实验级奶粉引起的(国内许多奶粉含有磷酸酶等杂质)。CST建议转膜后迅速在TBS中洗涤膜几秒,以便移除残留的转膜缓冲液,随后使用5%脱脂牛奶(请使用实验级的#9999)的TBST室温封闭1h,这一封闭步骤有助于降低非特异性...
五、膜的封闭:用TBST液洗涤印迹膜10分钟x2次。放入5%BSA(abs49001012)封闭液内,摇床震动,70转/分钟,室温封闭1小时30分钟。 六、一抗孵育: 6.1 配制一抗:按相应抗体的效价加入一抗稀释液,一抗稀释液按0.05% TBST(ml): BSA(g)=20:1配制。 6.2一抗孵育:将封闭后的膜放入杂交袋中,加入一抗约1ml,室温摇床...
用TBST液洗涤印迹膜10分钟x2次。放入5%BSA(abs49001012)封闭液内,摇床震动,70转/分钟,室温封闭1小时30分钟。 六、一抗孵育 ①配制一抗:按相应抗体的效价加入一抗稀释液,一抗稀释液按0.05% TBST(ml): BSA(g)=20:1配制。 ②一抗孵育:将封闭后的膜放入杂交袋...
WB实验中为防止印迹膜与检测系统中的蛋白成分(如抗体IgG等)发生非特异性吸附,导致实验结果不清晰,通常在进行一抗孵育前需预先对印迹膜上的非特异结合位点进行封闭。 本品以BSA为基础,采用独特配方,可快速高效地封闭膜上多余的结合部位,减少非特异结合情况的产生,降低背景,适用于各种转印膜的封闭,操作简单便捷。
抗体在生产过程中因为工艺达不到,有可能不纯,即它并不是单克隆抗体.若用这样的一抗孵育切片,可能造成非特异性结合,增加假阳性出现的概率 所以孵一抗时加入1%BSA,BSA可以用于中和一抗中的非特异性抗体,起到降低假阳性的作用.孵二抗时加1%BSA 同理 ...
01、转膜结束前30 min,以TBST为缓冲体系 配置封闭液,并利用涡旋仪、摇床等仪器使封闭液充分溶解并混匀; 02、转膜结束后,在抗体孵育盒中加入适量封闭液,并用镊子夹住条带,将其完全浸泡在封闭液中,置于摇床上室温摇动孵育1-2 h,也可以4 ℃冰箱孵育过夜。
01、转膜结束前30 min,以TBST为缓冲体系 配置封闭液,并利用涡旋仪、摇床等仪器使封闭液充分溶解并混匀; 02、转膜结束后,在抗体孵育盒中加入适量封闭液,并用镊子夹住条带,将其完全浸泡在封闭液中,置于摇床上室温摇动孵育1-2 h,也可以4 ℃冰箱孵育过夜。