coli BL21(DE3) 二、感受态细胞制备步骤 (一)平板制备流程 1.将超净工作台的紫外灯打开,将平皿、酒精灯、70%酒精、1000uL 枪头放入超 净工作台内,对超净工作台进行紫外灭菌 30 分钟。 2.超净工作台灭菌后打开风机至 3 档并关闭紫外灯,风机运行 5 分钟后将已灭菌 的固体培养基放在超净工作台上。 3....
BL21(competent cell)感受态细胞价格800元,BL21感受态细胞没有抗性,BL21感受态细胞菌株基因型见下文,感受态制备方法见下文,大肠杆菌BL21的是非毒性蛋白表达菌株,用于非T7启动子驱动的基因表达,表达水平极高。BL21超级感受态细胞是蛋白酶Lon和OmpT的缺陷
制备BL21感受态 一、氯化钙法制备BL21感受态的步骤: 1) 取大肠杆菌单菌落接种于2 ml LB液体培养基中,37 ℃200 rpm过夜培养; 2) 取0.5 ml菌液接种于50 ml LB液体培养基中,37 ℃200 rpm培养2.5 h (OD600nm介于0.4-0.5); 3) 菌液倒入冰浴预冷的50 ml离心管中,冰浴20 min,随后离心4 ℃,4100 rpm转,...
图1 感受态细胞 大肠杆菌BL21菌株一步法感受态细胞的制备 活化大肠杆菌BL21菌株, 从37℃培养过夜的新鲜LB平板中挑取BL21单菌落, 接种到3 m L LB液体培养基中, 37℃、200 r/min振荡培养过夜;取1 m L过夜培养菌液接种入100 m L液体LB培养基中, 37℃、200 r/min振荡培养至D600 nm=0.3~0.5 (约3 h) ;将...
DH5α和BL21感受态细胞的制备 分子生物学实验操作步骤 DH5α和BL21感受态细胞的制备 ( CaCl2法)注意在无菌条件下操作 1、将-70℃或-20℃保存的菌种从冰箱拿出，置于冰上，待菌体融化后，在固Lb 培养基上划线，用封口膜封好平皿，置于37℃条件下倒置培养12-16h，直至单菌落成型。2、用牙签或枪头挑单菌落于...
细胞制备感受培养基菌体cacl 分子生物学实验操作步骤DH5α和BL21感受态细胞的制备(CaCl2法)注意在无菌条件下操作1、将-70℃或-20℃保存的菌种从冰箱拿出,置于冰上,待菌体融化后,在固Lb培养基上划线,用封口膜封好平皿,置于37℃条件下倒置培养12-16h,直至单菌落成型。2、用牙签或枪头挑单菌落于液体Lb培养基(...
果表明，该一步法制备的ＢＬ２１菌株感受态细胞可获得１０６ ＣＦＵ／μ ｇＤＮＡ转化效率，完全能够满足常规转化要求。转化过程中相关参数的最佳条件为冰水浴３０ｍｉｎ，室温放置１０ｍｉｎ，３７℃、１５０ｒ／ｍｉｎ振荡复苏４０ｍｉｎ。 关键词：感受态细胞制备；一步法；大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）菌株；转化...
制备BL21(DE3)感受态细胞及质粒转化操作步骤
一步法制备大肠杆菌 BL21(DE3)菌株感受态细胞及转化 条件优化 张迹;李智;张宇;袁巧云 【期刊名称】《江苏农业科学》 【年(卷),期】2016(044)012 【摘要】大肠杆菌 BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株, 因此人们需要 1 种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法 一...
和普通制备感受态方法一样。注意再低温下操作。