培养基。 从超低温冰柜中取出DH5a菌种和BL21(DE3)菌种,放置在冰上。在超净工作台中用烧红的接种环插入冻结的菌中,然后接入含2mL LB培养基的试管中,37℃摇床培养过夜。 取0.5mL上述菌液转接到含有50 mL LB培养基的三角烧瓶中,37℃下25 r/min摇床培养2~3h,测定OD590为0.375(<0.4~0.6,细胞数<108/mL,此为...
coli BL21(DE3) 二、感受态细胞制备步骤 (一)平板制备流程 1.将超净工作台的紫外灯打开,将平皿、酒精灯、70%酒精、1000uL 枪头放入超 净工作台内,对超净工作台进行紫外灭菌 30 分钟。 2.超净工作台灭菌后打开风机至 3 档并关闭紫外灯,风机运行 5 分钟后将已灭菌 的固体培养基放在超净工作台上。 3....
感受态细胞制备方法 生物风在氯化钙感受态细胞制作方法的基础上进行了改良,采用最新的二价锰法感受态细胞制备方法,制备得到BL21(DE3)超级感受态细胞(Ultracompetent cell)。转化效率是常规氯化钙制备法的10倍。 感受态细胞操作方法 1. 取BL21(DE3)感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心...
该一步法制备的BL21菌株感受态细胞可获得106CFU/μg DNA转化效率,完全能够满足常规转化要求。转化过程中相关参数的条件为冰水浴30 min,室温放置10 min,37℃、150 r/min振荡复苏40 min。 参考文献 [1]张迹,李智,张宇,袁巧云.一步法制备大肠杆菌BL21(DE3)菌株感受态细胞及转化条件优化[J].江苏农业科学,2016,44...
该菌株适合于非毒性蛋白的表达。BL21(DE3)超级感受态细胞是采用大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺制备得到,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108-109,-80 ℃保存3-5个月转化效率不发生改变。 基因型:F-ompT hsdS(rB-mB-)gal dcm(DE3)...
本公司生产的BL21(DE3)pLysS感受态细胞是采用BL21(DE3)pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达107,-70℃保存6个月转化效率不发生改变。 基因型:F-,ompT,hsdSB(rB-mB-),dcm,gal(DE3),pLysS,Cmr 特点:该菌株带有质粒pLysS,因此具有氯抗性。质粒pLysS含有表达...
1.菌种培养:将BL21(DE3)感受态细胞转化到含有适当抗生素的琼脂平板上,如氨苄青霉素、卡那霉素等,并在37°C的培养箱中过夜孵育。在转化后的菌落成熟后,挑取一到两个单独的菌落转移到含有相同抗生素的培养基中,进行孵育。 2. 制备预培养液:将一小部分BL21(DE3)感受态细胞预培养在含有抗生素的LB培养基中。在37°C...
本品为使用大肠杆菌 BL21(DE3)菌株制备的高效化学感受态细胞,转化效率超过 107 cfu/μg DNA, 可以用于 pET 等系列质粒的蛋白高效表达。 产品组成 组分 BL21(DE3)感受态细胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL 定制 基因型:F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3) 存储条件 -80 ℃保存;请勿将本品置于-...
操作时，首先需将100μl冰上融化的BL21(DE3)感受态细胞加入目的质粒并轻轻混匀，然后在冰上静置25分钟。接着，将细胞置于42℃水浴中热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，避免剧烈晃动以减少转化效率。之后，向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后在37℃下以200rpm的速度复苏60...