coli BL21(DE3) 二、感受态细胞制备步骤 (一)平板制备流程 1.将超净工作台的紫外灯打开,将平皿、酒精灯、70%酒精、1000uL 枪头放入超 净工作台内,对超净工作台进行紫外灭菌 30 分钟。 2.超净工作台灭菌后打开风机至 3 档并关闭紫外灯,风机运行 5 分钟后将已灭菌 的固体培养基放在超净工作台上。 3....
培养基。 从超低温冰柜中取出DH5a菌种和BL21(DE3)菌种,放置在冰上。在超净工作台中用烧红的接种环插入冻结的菌中,然后接入含2mL LB培养基的试管中,37℃摇床培养过夜。 取0.5mL上述菌液转接到含有50 mL LB培养基的三角烧瓶中,37℃下25 r/min摇床培养2~3h,测定OD590为0.375(<0.4~0.6,细胞数<108/mL,此为...
制备BL21感受态 一、氯化钙法制备BL21感受态的步骤: 1) 取大肠杆菌单菌落接种于2 ml LB液体培养基中,37 ℃200 rpm过夜培养; 2) 取0.5 ml菌液接种于50 ml LB液体培养基中,37 ℃200 rpm培养2.5 h (OD600nm介于0.4-0.5); 3) 菌液倒入冰浴预冷的50 ml离心管中,冰浴20 min,随后离心4 ℃,4100 rpm转,...
BL21(competent cell)感受态细胞价格800元,BL21感受态细胞没有抗性,BL21感受态细胞菌株基因型见下文,感受态制备方法见下文,大肠杆菌BL21的是非毒性蛋白表达菌株,用于非T7启动子驱动的基因表达,表达水平极高。BL21超级感受态细胞是蛋白酶Lon和OmpT的缺陷
大肠杆菌表达系统是目前最常用的外源蛋白表达系统,大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。需要便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步...
DH5α和BL21感受态细胞的制备 ( CaCl2法)注意在无菌条件下操作 1、将-70℃或-20℃保存的菌种从冰箱拿出，置于冰上，待菌体融化后，在固Lb 培养基上划线，用封口膜封好平皿，置于37℃条件下倒置培养12-16h，直至单菌落成型。2、用牙签或枪头挑单菌落于液体Lb培养基（一般用分装2ml的试管），37℃培养12-16...
系统标签: 细胞 制备 感受 培养基 菌体 cacl 分子生物学实验操作步骤 DH5α和BL21感受态细胞的制备(CaCl2法) 注意在无菌条件下操作 1、将-70℃或-20℃保存的菌种从冰箱拿出,置于冰上,待菌体融化后,在固Lb培养基上划线,用封口膜封好平皿,置于37℃条件下倒置培养12-16h,直至单菌落成型。 2、用牙签或枪头...
果表明，该一步法制备的ＢＬ２１菌株感受态细胞可获得１０６ ＣＦＵ／μ ｇＤＮＡ转化效率，完全能够满足常规转化要求。转化过程中相关参数的最佳条件为冰水浴３０ｍｉｎ，室温放置１０ｍｉｎ，３７℃、１５０ｒ／ｍｉｎ振荡复苏４０ｍｉｎ。 关键词：感受态细胞制备；一步法；大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）菌株；转化...
·584· 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2012Apr;28(4):584～7 网络出版时间:2012—3—2716:15 网络出版地址:http:///kcms/detail/34.1086.R.20120327.1615.201204.584_033.html 质粒pBV220·PTD-tCNTF 转化BL21菌株感受态细胞的高效制备方法 吴行伟. -,刘泽源,李前,蒲韵竹。,任汝通。,许秀丽,刘...