Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测...
一、Annexin V/PI双染法Annexin V/PI双染法是基于生物学功能检测细胞凋亡的方法，即检测细胞膜完整性，可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测，目前流式是最常用的细胞凋亡检测方法之一。原理：Annexin V可与磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合，因此，可以作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。但Annexin...
用荧光素(FITC、Alexa Fluor488等)标记的Annexin-V作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生;碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。因此将Annexin-V与PI结合使用,就可以检测出细胞群体中的早期...
所以，通过Annexin V和PI双染的方法，就可以把早期凋亡的细胞与晚期凋亡加坏死的细胞区分开来。Annexin V-FITC/PI法的实验步骤：1，细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300g离心5min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬细胞并计数。2，取1-5×10^5重悬的细胞，300g离心5min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离...
Annexin V-FITC/PI双染流式分析细胞凋亡（图1）：图2：用阴性对照(左)或staurosporine(一种凋亡诱导剂)处理Jurkat细胞4小时，清洗，然后用ICT的Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(货号9124)染色10分钟。在流式细胞仪上读数细胞。阴性对照组仅在2.7%的细胞群中诱导了Annexin V-FITC标记(R2，左)，而staurosporine实验组...
艾美捷Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒操作步骤：(一)获得目的基因 1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一...
1、Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。 2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。 (三) 获得含重组表达质粒的表达菌种 1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5...
Annexin V和PI双染法研究细胞凋亡是经典的流式实验之一,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine, PS)在正常细胞中存在细胞膜内侧,在细胞凋亡早期磷脂酰丝氨酸从细胞膜内侧外翻到细胞膜表面,与Annexin V-FITC结合。而PI是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在细胞凋...
Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞...
(AnnexinV-FITC)/ PI双染法检测肿瘤细胞坏死及凋亡情况: 原理: 细胞膜组分磷脂酰丝氨酸(PS)在正常情况下位于细胞膜内侧,当细胞坏死或凋亡时,则迁移至细胞膜外侧。磷脂结合蛋白V(Annexin V)是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白,它与PS具有高度的结合力。荧光素FITC标记的Annexin V可以作为探针检测暴露在细胞膜外侧的磷脂...