ago2 rip实验原理go2 rip实验原理 RIP 实验基本原理: 1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。 2. 防止非特异性的RNA的结合。 3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。 4.结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。
于是,作者借助AGO2 RIP实验(云序生物提供此项服务)在实验组中拉取与AGO2蛋白直接结合的miRNA,通过miRNA 定量PCR,证实以上三个miRNA能够直接与AGO2蛋白结合,参与了海绵机制,并且也证实血小板分泌的miRNA的确是起活性的。 图2. miRNA高通量测序聚类图; miRNA定量PCR表明三者在共培养细胞中差异高表达 图3. AGO2 RIP...
为了进一步证实这一点,作者通过RIP-qRT-PCR显示,最丰富的内源性miRNA,包括miR100-5p、miR-148-3p、miR-10a-5p、miR-24-3p、miR-21-5p和miR-9-5p,与AGO2S417A的结合水平明显低于与AGO2WT的结合水平(图5F)。 为了确定pS417-AGO2转录后调控的基因表达,根据log2 [fold change]≥0.5(上调)或log2 [fold ...
为了进一步证实这一点,作者通过RIP-qRT-PCR显示,最丰富的内源性miRNA,包括miR100-5p、miR-148-3p、miR-10a-5p、miR-24-3p、miR-21-5p和miR-9-5p,与AGO2S417A的结合水平明显低于与AGO2WT的结合水平(图5F)。 为了确定pS417-AGO2转录后调控的基因表达,根据log2 [fold change]≥0.5(上调)或log2 [fold ...
Ago2的抗体进行RIP发现miRNA-1224和pre-circRNA-Filip1l; 通过功能实验和回复实验进一步证明Ago2在miRNA-1224调控circRNA-Filip1l的作用。 7.CircRNA-Filip1l通过调控Ubr5表达发挥作用 前面的工作主要围绕circRNA-Filip1l的上游机制展开,建立了miRNA-1224/Ago2/circRNA-Filip1l的调控轴,这一部分主要讲的是circRNA-Filip...
构建了FGDCL2和FGAGL2的同源重组敲除载体,通过分割标记法用PEG介导的原生质体转化禾谷镰刀菌,经PCR验证分别得到了2个DCL2基因敲除转化子和2个AGO2基因的敲除转化子... 王颖 - 《华中农业大学》 被引量: 4发表: 2013年 脆性X智力低下蛋白参与非编码RNA通路的研究进展 脆性X 综合征(Fragile X syndrome)是一种...
论⽂第⼀作者为潘志强教授、硕⼠⽣李国芳和孙梦兰，曹君利教授和潘志强教授为共同通讯作 者：来源:徐州医科⼤学官⽹ ⼀、研究背景 miRNA通过AGO2调控circRNA表达已有⽂章：miRNA- dependent gene silencing involving Ago2-mediated cleavage of a circularantisense RNA.EMBO J. 2011 Sep 30;30(21):4414...
To further explore whether pri-miR-19b1/pre-miR-19b1 was induced in A549 cells by serum stimulation, qRT-PCR were performed to show that only mature miR-19b but not pri-miR-19b1 and pre-miR-19b1 was induced (Figure S5), indicating that AGO2 acetylation increases miR-19b maturation ...
Where appropriate, the RIPAb+ set also includes quantitative RT-PCR control primers (RIP Primers) to biologically validate your IP results by successfully co-precipitating the specific RNA targets, such as messenger RNAs. The qPCR protocol and primer sequences are provided, allowing researchers to...
采用 qRT-PCR 技术检测 IRAK1/TRAF6 的表达水平.在 HepG2.2.15 细胞中,再分别转染 miR-146a mimic 及 Argonaute2蛋白(Ago2)siRNA 48h 后,western blot和qRT-PCR技术检测Ago2蛋白水平;Ago2 RIP(RNABinding ProteinImmunoprecipitation;RNA 结合蛋白免疫沉淀技术)后,qRT-PCR检测miR-146a的表达水平;Ago2 siRNA后...