此外,ac4C-RIP-qPCR显示,与对照hESC相比,NAT10 KD hESC中OCT4上ac4C丰度明显降低,而SOX2上ac4C丰度没有显著变化 (Figure 7C)。结果暗示SOX2调控NAT10敏感的ac4C靶基因的可信度较低。 之前的研究表明,NAT10介导的ac4C修饰可以通过调节靶mRNA的稳定性来发挥作用。mRNA半衰期分析显示:对照hESC中mRNA的半衰期明显长于...
作者检测发现临床黑色素瘤标本和细胞系中 MYO10 mRNA 水平显著高于正常组织和细胞(图 10A),ac4C - RIP - qPCR 实验证实黑色素瘤细胞中 MYO10 的 ac4C 水平更高。通过慢病毒转染 shRNA 沉默 MYO10 表达,qRT - PCR 验证了沉默效率(图 10B)。功能实验表明,MYO10 敲低显著抑制黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭...
B. RT-qPCR结果确认RRBP1 exon15 mRNA在对照组(siNC)中存在乙酰化,但在PCBP1/2、TDP43或NAT10耗竭后丢失。 C. RT-qPCR结果显示内源性RIP中PCBP1与RRBP1 exon15 mRNA相互作用。 D. RT-qPCR结果显示在TDP43和PCBP1/2敲除后,NAT10对RRBP1exon15 mRNA的亲和力分别降低或丧失。 E. 用于RNA下拉实验设计的RNA...
3. 再次通过qPCR和dot plot验证BMSCs成骨细胞分化过程中NAT10表达水平和ac4C修饰水平显著升高; 4. 将NAT10过表达/沉默可以促进/抑制BMSCs成骨分化过程; 5. 进行acRIP-seq鉴定发生ac4C修饰的靶基因RUNX2,修饰分布在3’UTR区; 6. 随后acRIP-qPCR验...
RIP-qPCR结果显示ac4C乙酰化FSP1 mRNA在NAT10敲低的HT-29和LoVo细胞中显著降低,而在NAT10过表达的SW-480和DLD-1细胞中显著升高。GEO数据集分析表明结肠癌组织中FSP1的表达低于邻近正常组织,并且NAT10和FSP1的表达呈正相关。同时,NAT10...
E-F. RT-qPCR结果显示PCBP1/2和TDP43对偏好性乙酰化修饰的mRNA 5′-UTR的结合具有多样性。 G. 通过抗NAT10抗体进行RIP的免疫沉淀Western blot结果:在对照组(siNC)和接头蛋白缺失组(siPCBP1/2和siTDP43)中,检测到NAT10、TDP43、PCBP1和PCBP2的免疫沉淀。当PCBP1/2缺失时,TDP43与NAT10之间的相互作用得以...
E-F. RT-qPCR结果显示PCBP1/2和TDP43对偏好性乙酰化修饰的mRNA 5′-UTR的结合具有多样性。 G. 通过抗NAT10抗体进行RIP的免疫沉淀Western blot结果:在对照组(siNC)和接头蛋白缺失组(siPCBP1/2和siTDP43)中,检测到NAT10、TDP43、PCBP1和PCBP2的免疫沉淀。当PCBP1/2缺失时,TDP43与NAT10之间的相互作用得以...
E-F. RT-qPCR结果显示PCBP1/2和TDP43对偏好性乙酰化修饰的mRNA 5′-UTR的结合具有多样性。 G. 通过抗NAT10抗体进行RIP的免疫沉淀Western blot结果:在对照组(siNC)和接头蛋白缺失组(siPCBP1/2和siTDP43)中,检测到NAT10、TDP43、PCBP1和PCBP2的免疫沉淀。当PCBP1/2缺失时,TDP43与NAT10之间的相互作用得以...
通过 acRIP - qPCR、RIP - qPCR、双荧光素酶报告实验、RNA 衰减实验等发现,NAT10 能与 NFE2L3 mRNA 结合并诱导其 ac4C 乙酰化修饰,促进 NFE2L3 mRNA 的稳定性和翻译效率,二者表达呈正相关。 NAT10 通过调节 NFE2L3 促进 ccRCC 进展:构建 NFE2L3 敲低细胞系,实验表明 NFE2L3 敲低抑制细胞增殖和迁移,...
为了进一步验证ac4C acRIP-seq结果,本研究对心肌细胞中ac4c乙酰化基因进行了acRIP-qPCR检测(图5 D)。结果所示,相对于抗IgG片段,Mybpp1a在抗NAT10免疫沉淀片段中显著富集,并且NAT10过表达进一步增强了这种富集(图5 D)。由于NAT10增加了Mybbp1a mRNA和蛋白水平,本研究在心肌细胞中进行了放线菌素D处理的RNA衰变...