AAV-报告基因表达系统方法基于AAV-Luciferase表达系统在体外感染HEK293T之前与样本孵育。感染孵育后HEK293T细胞经裂解通过Luciferase催化相应底物,采用酶标仪读取数据,通过荧光信号值计算中和抗体对病毒感染的抑制程度。如果样品中存在抗AAV中和抗体会阻断AAV感染细胞从而导致信号值降低。通常信号值与中和抗体的强度呈负相关...
临床前生物分析实践中采用AAV-Luciferase模拟基因治疗药物。将AAV-Luciferase和待测样品孵育,加入到HEK293T细胞。AAV-报告基因表达系统方法基于AAV-Luciferase表达系统在体外感染HEK293T之前与样本孵育。感染孵育后HEK293T细胞经裂解通过Luciferase催化相应底物,采用酶标仪读取数据,通过荧...
结论：LNP较AAV，具有更低的免疫原性，可以实现有效的重复给药。作者在表达Luciferase的小鼠基因中插入人抗肌萎缩蛋白45号外显子的序列（Fig. 5A）以检测敲除效率。以LNP对比传统的AAV载体，同样包裹CRISPR-Cas9系统与两种hEx45 sgRNA，注射入小鼠右腿；经28天后再注射入左腿，再经28天后检测荧光（Fig. 5B）。接受...
多项研究报道,与使用GFP报告系统的TI检测相比,使用荧光素酶(luciferase)报告系统的TI检测能更灵敏地检测到NAb。 用于TI检测的细胞类型多种多样,包括HEK293、HeLa和Huh7细胞系,其中以HEK293细胞系最为普遍。不同的AAV衣壳血清型对这些细胞系的转导效率各不相同。转导效率低的衣壳会导致较低的转基因表达水平,因此...
在不同pH值和温度下预孵化24小时后的rAAV-Luciferase载体的细胞转导显示了所有AAV血清型转导效率的类似趋势。在-80°C和4°C储存的样本中,最高的转导水平分别在pH 7.4和6.0观察到。较高的温度和低pH储存条件使转导效率降低了80%以上。在所有血清型中,rAAV5最...
AAV7在肝脏中与AAV9相当。而AAV4在肺和肾里有最高的病毒基因组分布,在心脏中也有较高水平分布。AAV6则在心脏、肝脏、骨骼肌中有观察到。下图为Luciferase蛋白表达水平不同血清型的表达情况: 那么问题来了,不同器官组织,如何选择合适的血清型和注射方法呢?
维真生物利用荧光素酶报告系统在体外进行 AAV 中和抗体的检测，可以检测待测样本中是否有特定血清型的中和抗体，以方便客户选择不同的动物模型或者不同血清型的 AAV。通过检测 Luciferase 发光值RLU，根据发光值计算待检样本中抗 AAV 病毒的中和抗体是否存在，判断血清 / 抗体对该血清型的 AAV病毒是否具有中和活性。服...
赛业生物可提供高纯度、高滴度、多种血清型的AAV现货病毒,基因类型包含EGFP、mCherry及Luciferase荧光蛋白、Cre重组酶、GCaMP6f钙指示、化学遗传及光遗传等工具酶,货期短,质量优,欢迎咨询订购。 咨询订购 热门活动推荐 2024年11月15日-12月31日期间,现货病毒限量试用,定制套装3998元起。
维真生物利用荧光素酶报告系统在体外进行 AAV 中和抗体的检测,可以检测待测样本中是否有特定血清型的中和抗体,以方便客户选择不同的动物模型或者不同血清型的 AAV。通过检测 Luciferase 发光值RLU,根据发光值计算待检样本中抗 AAV 病毒的中和抗体是否存在,判断血清 / 抗体对该血清型的 AAV病毒是否具有中和活性。
将包装的Luciferase病毒玻璃体腔注射小鼠,注射剂量为3E+9vg/只眼,3W后通过活体成像和化学发光法检测Luciferase表达情况。活体成像(图10)显示,3个变体Lucifersae信号强度均高于AAV2和AAV2.7M8。为了对其进行更准确的定量,处死小鼠摘取眼球,匀浆后进行化学发光检测,PM054变体Lucifersae表达量最高,为AAV2的15倍,PM021和...