本研究主要探讨了CRISPR-Cas9与AAV6修复模板在基因组编辑过程中产生的串联插入病毒载体基因组问题。 1. 细胞培养与基因编辑:利用CRISPR-Cas9和AAV6载体对人类多能干细胞(iPSCs)和造血干细胞(HSPCs)进行基因编辑,以实现靶向基因敲入。 2. 数字PCR检测:采用数字PCR(ddPCR)技术检测编辑细胞中的基因型,包括野生型、单等...
小鼠全身注射MyoAAV1A后高效转导至骨骼肌（来源：Cell）Tabebordbar等人在DMD和XLMTM小鼠模型中使用MyoAAV 1A后均表现出积极的效果。结果显示在DMD小鼠中，与AAV9载体相比，携带CRISPR-Cas9基因编辑系统的MyoAAV 1A将骨骼肌中的缺乏肌营养不良蛋白表达提高至更高的水平。在XLMTM小鼠模型中，经过MyoAAV 1A载体治疗后小...
基于CRISPR/Cas9的AAV载体无疑是体内基因治疗最理想、最具前景的方式。 金风玉露一相逢,便胜却人间无数。 8月14日,麻省大学医学院高光坪教授团队在Nature Biotechnology杂志发表题为:Cas9-mediated allelic exchange repairs compound heterozygous recessive mutations in mice的研究论文(图1),该研究首次通过AAV介导的CRI...
为了设计具有额外功能的单个Nme2 Cas9载体,创建了一个缩短的Nme2 Cas9+sgRNA主链。在Nme2 Cas9结构信息和指导要求的经验测试指导下,截断了重复链,以产生两个缩短的121nt和100nt sgRNA(分别为Nme.sgRNA-121和Nme.sgRNA-100)。 将截短的引物克隆到先前发表的Nme2 Cas9-AAV主链中。通过将质粒转染到HEK 293T(人类...
CRISPR - Cas9系统能精准识别特定基因序列 。AAV作为载体具有低免疫原性的特点 。将CRISPR - Cas9与AAV结合可用于敲低基因 。AAV可高效递送CRISPR - Cas9相关组件到靶细胞 。该结合技术能对特定细胞类型的基因进行敲低 。实验中常利用AAV的不同血清型来优化递送 。CRISPR - Cas9的sgRNA设计决定基因敲低的特异性...
for AAV gene therapies targeting the central nervous system. J Neurodev Disord. 2018 May 18;10(1):16.作者：海星生物 公众号：Cas9X细胞基因编辑 以上内容由海星生物（http://www.cas9x.com)提供 CRISPR/Cas9细胞基因编辑 载体/病毒包装 PDO/动物模型CDX 稳转细胞株 干细胞/原代细胞 培养试剂盒 ...
CRISPR-Cas9能够在基因中的特定位置进行精准地剪切和修复。研究团队成功地将CRISPR-Cas9注射到患湿性老年黄斑变性的小鼠眼中,并修改了VEGF基因。他们通过观察脉络膜新生血管(CNV)的方式监控眼部疾病进程,CNV是视网膜和巩膜之间新形成的血管,它是湿性黄斑变性的常见问题,研究人员发现,CNV区域减少了58%。此外,锥体机能不良...
通过AAV利用Crispr/Cas9技术做在体敲除，理论上可以实现但实际上很难得到想要的结果，一方面是本身编辑效率低，另一方面是体内无法做筛选，最终得到的可能只是敲低的效果甚至是没有变化，因此风险很高。另一种方法是运用cre-loxp系统进行的敲除，前提是必须要有flox动物，再配合AAV-cre使用即可实现靶基因的敲除。11、...
与其他基于CRISPR的系统(包括第一代Cas9核酸酶)相比,该系统具有多种编辑功能。通过利用Regeneron在AAV和抗体工程方面的专业知识,以及Mammoth在超紧凑基因编辑方面的专业知识,两家团队将努力创造出可以递送到肝脏以外组织的疾病修饰药物,以更好...
研究团队使用 CRISPR-Cas9 基因编辑技术,采用重组腺相关病毒(AAV)进行供体DNA的传递,在人健康皮肤黑色素细胞中依次编辑5种黑色素瘤相关基因突变或其组合,这些基因跨越了6个常见的黑素瘤通路:CDKN2A,BRAF (MAPK),TERT(端粒酶),PTEN (PI3...