在不含P40序列的GFP载体上也观察到类似的趋势,这表明P40元件的存在对用于生物筛选的上游串联启动子的调控几乎没有影响。由于TRACER结构缺乏全长rep序列,在病毒产生过程中,rep蛋白由单独的质粒来提供。 Fig5:C57BL/6小鼠TRACER文库NGS测序分析 依赖于Cre酶的病毒DNA定向进化策略可能会受到病毒产毒能力的影响,也会有检...
而另一项研究中,Quirin KA等人使用scAAV进行导管逆行注射感染胰腺,如图2所示,AAV6更好地感染腺泡细胞(图2-C),导管(图2-D)和胰岛(图2-E)[2]。 图1. 不同血清型的AAV-CAG-GFP通过导管注射对胰脏腺泡细胞进行感染 图2.不同血清型的scAAV-EF1a-eGFP通过导管注射对胰腺进行感染 二、组织(细胞)特异性启动子 ...
消瘦小鼠尾静脉注射5E+12 vg的AAV8或AAV9-CAG-GFP载体,全身的白色和棕色脂肪库被转导,但不同脂肪库中的转导效率因小鼠品系而异(ICR小鼠与C57Bl/6J小鼠中不同)。重要的是,糖尿病肥胖ob/ob小鼠或db/db小鼠血管内给药AAV8或AAV9载体,也得到了消瘦小鼠中WAT、BAT类似的转导效率。 案例2:通过AAV介导棕色脂肪...
而另一项研究中,Quirin KA等人使用scAAV进行导管逆行注射感染胰腺,如图2所示,AAV6更好地感染腺泡细胞(图2-C),导管(图2-D)和胰岛(图2-E)[2]。 图1. 不同血清型的AAV-CAG-GFP通过导管注射对胰脏腺泡细胞进行感染 图2.不同血清型的scAAV-EF1a-eGFP通过导管注射对胰腺进行感染 二、组织(细胞)特异性启动子 ...
图1. 不同血清型的AAV-CAG-GFP通过导管注射对胰脏腺泡细胞进行感染 图2.不同血清型的scAAV-EF1a-eGFP通过导管注射对胰腺进行感染 二、组织(细胞)特异性启动子 胰腺中细胞构成复杂,不同启动子的应用可以帮助研究者实现目的基因在不同细胞中的表达选择性。在研究中可以选择广谱性启动子CMV,也可以针对不同细胞选择相...
2、特异性:有一些不同的rAAV成分可以驱动特定细胞/组织中的基因表达; 这些成分包括启动子,Flp或Cre依赖性基因开关,以及血清型(血清型将在下面更详细地讨论)。如果您的目标是广泛表达,那么广泛活跃的启动子,如CAG(具有CMV即时早期增强子的鸡β肌动蛋白启动子),是一个不错的选择。如果您有特定的靶细胞类型,您可能...
高滴度:纯化型AAV病毒滴度高达10^14GC/ml (genome copies/ml) *AAV克隆可选启动子 CMV, EF-1α, CAG, CBh, CAMKlla, hSYN, MHC *AAV对照颗粒选择 GFP, IRES-GFP, LacZ, CRE, mCherry, FLuc, GLuc AAV应用 可用于基因过表达,敲低,敲除的体内或体外实验...
在胰腺研究应用中,AAV介导的Igf1胰腺过表达抑制了小鼠自身免疫性糖尿病的进展。Mallol等人选择CAG启动子[15],利用AAV8-CAG-GFP作为载体在NOD小鼠通过胰腺导管注射的方式进行感染(注射滴度1.00E+12 vg/mL)。通过AAV介导的基因转移Igf1的局部表达抵消了小鼠向糖尿病的进展,注射后2周取材切片免疫荧光观察。
如图6A所示,研究人员将AAV-DJ-CAG-Cre通过尾静脉注射至8周龄雄性Uba3F/F和同窝Uba3F/+ 小鼠体内,IB分析证实Uba3F/F小鼠肝脏中UBA3缺失,但心脏和肾脏中没有,证明肝脏特异性UBA3缺失小鼠模型构建成功。经AAV-DJ-Cre转导后,Uba3F/F小鼠和Nedd8F/F小鼠肝脏中UBA3、Nedd8的缺失导致ETFs蛋白表达水平的显著下降;...
为了进一步研究这些启动子的心脏腔室特异性活性,研究人员采用Cre重组酶(Cre)双荧光报告基因小鼠(mT / mG)作为实验动物,转基因包含CAG启动子及其下游的Tomato(一种红色荧光蛋白)和GFP基因,示意图见图A。因此,每个mT / mG小鼠细胞都是Tomato阳性...