使用AAV2-CAG载体系统能确保在小鼠视网膜中充分转染 不同滴度和体积的AAV2-CAG-GFP通过巩膜注入成年雄性C57BL/6小鼠眼睛的玻璃体(颞上缘后方约3 mm处),3周后检测整个视网膜中GFP表达。结果显示2μL,1×1010VP(Virus Particle)/眼表达效果最好。2μL,1×1010VP/眼处理小鼠视网膜平铺扫描结果表示病毒载体主要转导...
这种方法为研究脂肪组织功能障碍的代谢和分子机制以及开发治疗肥胖和2型糖尿病的新疗法提供了宝贵的工具。静脉注射5x10^12 vg的AAV8或AAV9-CAG-GFP载体到正常小鼠,可以转染全身的WAT和BAT组织,但不同脂肪组织的转染效率有所差异。采用局部给药可以更有效地转染特定的脂肪组织。例如,直接注射到棕色脂肪组织(iBAT)中可...
而另一项研究中,Quirin KA等人使用scAAV进行导管逆行注射感染胰腺,如图2所示,AAV6更好地感染腺泡细胞(图2-C),导管(图2-D)和胰岛(图2-E)[2]。 图1. 不同血清型的AAV-CAG-GFP通过导管注射对胰脏腺泡细胞进行感染 图2.不同血清型的scAAV-EF1a-eGFP通过导管注射对胰腺进行感染 二、组织(细胞)特异性启动子 ...
AAV-CAG-Cre-GFP (AAV9),即AAV9 serotype adeno-associated virus (AAV) expressing Cre-GFP,是一种可表达Cre和GFP融合蛋白的腺相关病毒,常用于注射小鼠等动物后进行基因编辑。CAG启动子是一种由巨细胞病毒(CMV)增强子和鸡β-肌动蛋白启动子组合而成的可以用于大多数基因编辑的高效启动子,驱动基因在真核细胞内...
另外,我们还比较了同一血清型病毒载体(AAV2/8)包装CAG和CMV两种启动子时的表达差异,在视网膜下腔注射后两周检测GFP荧光蛋白表达情况,发现在两种启动子作用下,GFP在感光细胞的表达量相差不大,但明显的差异是AAV2/8-CMV在RPE细胞有很强的表达,而AAV8-CAG在相同部位几乎没有表达(图4), 说明AAV8-CAG对感光细胞特...
图1. 不同血清型的AAV-CAG-GFP通过导管注射对胰脏腺泡细胞进行感染 图2.不同血清型的scAAV-EF1a-eGFP通过导管注射对胰腺进行感染 二、组织(细胞)特异性启动子 胰腺中细胞构成复杂,不同启动子的应用可以帮助研究者实现目的基因在不同细胞中的表达选择性。在研究中可以选择广谱性启动子CMV,也可以针对不同细胞选择相...
图1. 不同血清型的AAV-CAG-GFP通过导管注射对胰脏腺泡细胞进行感染 图2.不同血清型的scAAV-EF1a-eGFP通过导管注射对胰腺进行感染 二、组织(细胞)特异性启动子 胰腺中细胞构成复杂,不同启动子的应用可以帮助研究者实现目的基因在不同细胞中的表达选择性。在研究中可以选择广谱性启动子CMV,也可以针对不同细胞选择相...
作者首先设计并测试了AAV8载体,启动子选择CAG(1.7kb),用于表达blinatumomab的氨基酸序列[1](blinatumomab瞬时连接T细胞与靶细胞,促进T细胞活化和靶细胞凋亡,最先进的药物,但半衰期只有2.1h);为了保证蛋白质双特异性抗体(CD19×CD3)高效地分泌到血液中,作者将分泌信号肽构建到外源基因的N端[2]。完成AAV的设计后,作者...
为了进一步研究这些启动子的心脏腔室特异性活性,研究人员采用Cre重组酶(Cre)双荧光报告基因小鼠(mT / mG)作为实验动物,转基因包含CAG启动子及其下游的Tomato(一种红色荧光蛋白)和GFP基因,示意图见图A。因此,每个mT / mG小鼠细胞都是Tomato阳性...
作者首先设计并测试了AAV8载体,启动子选择CAG(1.7kb),用于表达blinatumomab的氨基酸序列[1] (blinatumomab瞬时连接T细胞与靶细胞,促进T细胞活化和靶细胞凋亡,最先进的药物,但半衰期只有2.1h);为了保证蛋白质双特异性抗体(CD19×CD3)高效地分泌到血液中,作者将分泌信号肽构建到外源基因的N端[2]。完成AAV的设计后,作者...