2.细胞活力：G418浓度越高，细胞活力越低。在低浓度G418（如0.25 mg/ml）下，细胞活力较高，细胞形...
筛选浓度确定：293T 细胞对 G418 较为敏感，筛选浓度多在 200 - 800μg/mL 区间，但最适配浓度需预实验摸索。准备多组六孔板，每孔铺适量且等量 293T 细胞（约 5×10⁵个 /mL），待细胞贴壁、状态良好（24 小时后），分别加入含不同浓度 G418（如 200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL）...
使用G418筛选HEK-293T细胞的详细步骤 1. 细胞培养：复苏HEK-293T细胞，用合适的培养基（如DMEM高糖培养基，含 10%胎牛血清等）在37℃、5% CO₂培养箱中培养，待细胞汇合度达80%-90% 时进行传代或转染操作。2. 确定G418筛选浓度：如客户所做，在96孔板中接种细胞，设置 0 - 1100 μg/mL的G418浓度梯度...
在高浓度G418下,细胞形态严重受损,细胞体积极小,细胞边缘破碎。 4.细胞抗性:G418浓度越高,细胞抗性越强。在低浓度G418下,细胞对G418的敏感性较高,细胞容易死亡。随着G418浓度的增加,细胞逐渐产生抗性,细胞存活率提高。在高浓度G418下,细胞抗性达到顶点,细胞能够抵抗高浓度的G418毒性。 所以,对于293T细胞,G418的筛选...
在细胞生物学研究领域,利用 G418 对 293T 细胞进行筛选是常见操作,旨在精准获取稳定转染特定基因的细胞株,以下详述浓度与操作要点。 筛选浓度确定:293T 细胞对 G418 较为敏感,筛选浓度多在 200 - 800μg/mL 区间,但最适配浓度需预实验摸索。准备多组六孔板,每孔铺适量且等量 293T 细胞(约 5×10⁵个 /mL...
在细胞生物学研究领域,利用 G418 对 293T 细胞进行筛选是常见操作,旨在精准获取稳定转染特定基因的细胞株,以下详述浓度与操作要点。 筛选浓度确定:293T 细胞对 G418 较为敏感,筛选浓度多在 200 - 800μg/mL 区间,但最适配浓度需预实验摸索。准备多组六孔板,每孔铺适量且等量 293T 细胞(约 5×10⁵个 /mL...
使用G418筛选HEK-293T细胞的详细步骤 1. 细胞培养:复苏HEK-293T细胞,用合适的培养基(如DMEM高糖培养基,含 10%胎牛血清等)在37℃、5% CO₂培养箱中培养,待细胞汇合度达80%-90% 时进行传代或转染操作。 2. 确定G418筛选浓度:如客户所做,在96孔板中接种细胞,设置 0 - 1100 μg/mL的G418浓度梯度,用CCK...
1. 筛选前准备:在筛选前,需要将293T细胞接种到含有G418的培养基中。为了提高筛选效率,可以先将细胞接种到含有较低浓度G418的培养基中,然后逐渐提高浓度。此外,可以预先在培养基中加入适量的抗生素,如庆大霉素或卡那霉素,以防止污染。 2. 筛选过程:在含有G418的培养基中,细胞可能会出现不同程度的损伤。为了减轻细...
293T/17细胞是293T细胞中共转染pBND和pZAP质粒而获得的具有G418耐受的细胞系。该细胞系仍保留高转染效率的特点。 293T/17SF细胞是在293T细胞中转入EBV基因形成的转化细胞系,该细胞系主要用于瞬时转染及蛋白表达,类似于293E细胞的作用。 293H细胞是293细胞驯化...
2）构建稳定细胞株，转染后24小时可加入合适的筛选药物如G418或嘌呤霉素筛选稳定细胞株 293t细胞转染实验步骤 中的注意事项：1. 使用高的纯度 DNA (A260/A280=1.8) 有助于获得较高的转染效率。对于质粒，建议使用质量较高的无内毒素质粒提取试剂盒进行质粒提取。2、细胞的生长状态会对细胞的转染效率造成较大影响...