单细胞测序技术以单个细胞作为对象,通过对单个细胞遗传物质均匀扩增,标记建库后进行测序,最后对单个细胞基因组或转录组展开数据分析,其技术原理主要包括单细胞分离、扩增测序和数据分析3方面。 单细胞分离:主要包括荧光激活细胞分选法( flow- activated cell sorting ,FACS) 以及微流控分选法( microfluidics) 等。市场上...
将单个细胞包裹在油包水的微液滴中。基于Drop-seq的原理，10x Genomics在流动的管道中创建了一个高效的...
(5)真正意义的单细胞测序:单个GEMs捕获到多个细胞的概率极低(<0.9%/1000cells)。 (6)性价比高:与其它单细胞测序平台相比,性价比更高。 (7)细胞可适性高:对细胞大小(直径超过40μm细胞需要制备细胞核)及细胞类型(组织类细胞、免疫细胞、血液细胞、癌组织细胞...
单细胞测序(Single cell RNA sequencing,scRNA-seq)是在单个细胞水平进行转录组学分析的技术。在单个细胞的分辨率下,科学家能真正的定义细胞类型特定的基因表达,分辨出细胞的异质性。这是过去RNA-seq所无法企及的。 在众多的单细胞测序平台中,10×genomics最受欢迎表现最亮眼。其采用了基于微滴的微流体技术来分选细...
10XGenomics平台的高通量单细胞RNA-seq技术是利用液滴法的原理,使用GemCode技术,通过控制微流体的进入,将带有barcode、UMI(分子标签)、引物及酶的凝胶珠(Gelbeads)与单细胞混合,从而实现大规模的单细胞分离,以及单细胞文库构建的技术。 10X Genomics平台的液滴封装大约有50%的捕获效率,可在6分钟内完成10^4级别的单...
图2.10×genomics测序原理 ◎基于微孔板的BD Rhapsody BD Rhapsody技术利用卡式芯片在磁性的寡核苷酸条形码标记微球上实现单细胞捕获和 mRNA 转录本的分子标签,然后将这些微球合并到单个管中用于 cDNA 扩增和文库构建。可满足 100~10,000 个细胞的自动分选、扩增及建库...
3.单细胞测序(10×genomics技术)的原理(数据产生) 单细胞 RNA 测序(Single cell RNA sequencing,scRNA-seq)是一种在单细胞水平上利用 RNA 测序对特细胞群体进行基因表达谱定量的高通量实验技术。待测组织经过单细胞分离、RNA 提取、逆转录、文库构建和测序,便可利用数据分析(cellraner+seurat等)获得多个细胞的基因...
10x Genomics技术是一种革命性的单细胞测序方法,它可以在单细胞分辨率水平上获取基因组、转录组和表观组数据。这种技术的原理包括以下几个关键步骤: 1.单细胞悬浮液制备: 首先,将组织或细胞样本制备成单细胞悬浮液。这通常通过机械或酶处理来实现。 2.微滴封装: ...
在这个油包水体系里进行cDNA的扩增。2、然后细胞破碎,以cDNA为模板进行PCR扩增。3、然后制备生成的测序文库可以在illumina平台进行测序。3、然后可用cellranger等软件直接对illumina产生的数据进行分析。 10×barcode gel beads 10×标记的凝胶微珠,携带了UMI和barcode,能和单细胞结合形成GEMs。该10×genomics系统有350...
通过UMI条形码和Microfluidics微流体技术，一次分离并标记100-10000个细胞，测序通量通常为50000reads/per cell。10XGenomics平台的高通量单细胞RNA-seq技术利用液滴法原理，结合GemCode技术，通过控制微流体的进入，将带有barcode、UMI（分子标签）、引物及酶的凝胶珠（Gelbeads）与单细胞混合，实现大规模的单...