3-5×105细胞随后按等分加入96孔圆底培养板中并且用FACS缓冲液(含有10%正常山羊血清,0.2%BSA,和0.1%NaN3的PBS)洗涤3次。将细胞团和100μl、10μg/ml的初级抗体(生物素酰化的8F3或同种型对照)重悬于100μl FACS缓冲液,冰上保温1小时。然后将该培养板离心,用针状物吸出上清液。然后如上所述用FACS缓冲液再...
1ml 盐酸羟胺(10%) 超声 5min;加入 2ml 邻二氮菲(10%),然后依次加入 2ml 6mol/L 的 NaOH、5ml HAc-NaAc 缓冲液,调节 pH 值至 5~6,静置 20min 使之显色;定容至 50ml 放置 30 分钟,以去离子水为参照,在波长 510nm 测其 OD 值,找 出对应的铁浓度,取 3 次读数求得平均值作为最终溶液铁浓度。
(6)甩去多余液体,每张切片滴加一滴(50μ l)第一抗体,(兔抗 HIF-1a 多克隆 抗体稀释浓度为 1:50;鼠抗 VEGF 单克隆抗体稀释浓度为 1:200;兔抗 Glut1 多克隆抗体稀释浓度为 1:200;兔抗 CD34 多克隆抗体稀释浓度为 1: 100),4℃过夜。(7)PBS 冲洗 3’ ×3,甩去 PBS 液,每张切片滴加一滴(50μ ...