逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR) 的原理是:提取组织或细胞中的总 RNA,以其中的 mRNA 作为模板,采用 Oligo(dT) 或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA。再以 c…
实时PCR(RT-PCR)是一种使用荧光染料或探针(实验室通常称为引物)技术对样品中存在的核酸进行定量的技术或实现靶基因/序列的扩增。RT-PCR足以扩增目标或模板DNA (cDNA是其中一种),也就是说,它可以在PCR仪器(热循环仪器)复制DNA。它使我们能够研究目标序列或基因,因此一直是遗传学中的一项关键技术。 (图3 RT-PCR...
【分子生物学】17.6 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR) 生命中国· 2022-5-10 1674021:40 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR) 我认识路呀· 2022-12-14 5869220:21 【实验方法】 科研基本功|逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)操作方法全过程教学视频 DLab实验室· 2021-8-4 22.2万19603:21 【三分钟理解】 PCR - ...
逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)
1、PCR原理:在解旋酶作用下,打开DNA双链,每条DNA单链作为母链,以4种游离脱氧核苷酸为原料,合成子链,在引物作用下,DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链,即DNA的合成方向是从子链的5'端向3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。
(4)RT-PCR过程中主要借助对温度的控制,影响酶的活性,从而使得化学反应有序高效地进行。(5)利用RT-PCR技术获取的目的基因能在物种之间交流;该技术还可用于对某些微量RNA病毒的检测,可提高检测的灵敏度,原因是增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量(或浓度),便于检测。
(3)PCR 程序:42℃ 2min。 2.配制第一链 cDNA 合成反应液 (1)在 RNase-free 离心管中按照下表配制 20mμL 体系(以 Takara 试剂盒 Prime Script™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time),SYBR Green Ⅰ法为例)。 试剂 步骤 1 的反应液 Prime Script RT Enzyme Mix I RT Primer Mi ...
RT-PCR所用的酶包括逆转录酶和热稳定DNA聚合酶,A正确;引物之间不能相互配对,否则不能正常发挥作用,B错误;反应体系中加入dNTP,可以为复制过程提供能量,反应过程中高温即可解旋,不需要解旋酶解旋,C错误;正常情况至少经过2次循环,方可获取与目的基因等长的DNA单链,D错误。
百度试题 结果1 题目逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)就是在应用PCR方法检测RNA病毒时,以RNA为模板,在逆转录酶的作用下形成cDNA 链,然后以cDNA为模板进行正常的PCR循环扩增。( ) 相关知识点: 试题来源: 解析 正确 反馈 收藏