逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。作用 RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极...
实时PCR(RT-PCR)是一种使用荧光染料或探针(实验室通常称为引物)技术对样品中存在的核酸进行定量的技术或实现靶基因/序列的扩增。RT-PCR足以扩增目标或模板DNA (cDNA是其中一种),也就是说,它可以在PCR仪器(热循环仪器)复制DNA。它使我们能够研究目标序列或基因,因此一直是遗传学中的一项关键技术。 (图3 RT-PCR...
1、PCR原理:在解旋酶作用下,打开DNA双链,每条DNA单链作为母链,以4种游离脱氧核苷酸为原料,合成子链,在引物作用下,DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链,即DNA的合成方向是从子链的5'端向3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。
(2)RT-PCR是先将新型冠状病毒的RNA逆转录成cDNA,然后再进行PCR(体外DNA复制),探针能与N基因序列特异性结合,由于DNA的结构为反向平行的两条链,5′与3′互补配对,因此与探针结合的序列应该是5′-AATCT……AGCAA-3′;PCR扩增时荧光探针被Taq酶切降解,使报告荧光基因和淬灭荧光基因基团分离,即每扩增一个DNA分子...
新冠病毒是一种单链RNA病毒,常用“荧光RT-PCR技术”(实时荧光逆转录聚合酶链式反应)进行检测,如图1所示。该过程中当TaqMan探针完整时,荧光基团(R)发出的荧光信号被淬灭基团(Q)吸收而不发荧光;当探针水解释放出游离的R和Q,R发出的荧光信号被相应仪器检测到,荧光信号的累积与PCR产物数量完全同步。请分析并回答下列...
国际原子能机构与联合国粮食及农业组织合作帮助各国使用实时逆转录-聚合酶链反应应对病毒。 阅读原文:如何使用实时逆转录-聚合酶链反应检测新冠病毒? | IAEA 随着引起新冠疾病的冠状病毒在全球范围内传播,原子能机构与联合国粮食及农业组织(粮农组织)合作,提供支持和专门知识,帮助各国使用实时逆转录-聚合酶链反...
图1和图2所示新冠检测基本原理是:将新冠病毒RNA逆转录为DNA,采用多重荧光RT-PCR技术,因此荧光PCR法所用的试剂盒中通常都应该含有:逆转录酶、热稳定性DNA聚合酶(Taq酶)、TaqMan探针、引物、dNTP、Mg2+、缓冲剂系等。(2)由图2可知,引物、TaqMan探针能与模板链结合,因此,探针是依据新冠病毒RNA内部的一段序列(...
1.3 RT-PCR名词解释 预变性（Denaturation）是指DNA双螺旋结构中的碱基对氢键断裂，导致双链变为单链的过程。通过将双链DNA加热至94℃左右，使其在260nm波长处的紫外吸收值达到最大值，DNA的变性过程可以明显观察到。预变性有助于彻底解开DNA双链，并激活热稳定的DNA聚合酶。退火（Annealing）是在54-...
A、过程①是由mRNA形成单链DNA的过程,表示逆转录,A正确;B、决定实时荧光RT-PCR扩增片段的是引物,过程②、③拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,根据DNA分子半保留复制特点可知,该过程理论上至少需要2n-1个引物B,B错误;C、游离的脱氧核苷酸只能从引物的3'端开始连接,C错误;D、利用实时荧光RT-PCR技术对某些微量RNA...
实时荧光RT-PCR可用于新型冠状病毒的核酸检测,RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA聚合酶链式扩增反应相结合的技术,其原理是:在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合,探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团,新链延伸过程中,DNA聚合酶会破坏探针,导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT-PCR进行核酸检...