1、PCR原理:在解旋酶作用下,打开DNA双链,每条DNA单链作为母链,以4种游离脱氧核苷酸为原料,合成子链,在引物作用下,DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链,即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。
国际原子能机构与联合国粮食及农业组织合作帮助各国使用实时逆转录-聚合酶链反应应对病毒。 阅读原文:如何使用实时逆转录-聚合酶链反应检测新冠病毒? | IAEA 随着引起新冠疾病的冠状病毒在全球范围内传播,原子能机构与联合国粮食及农业组织(粮农组织)合作,提供支持和专门知识,帮助各国使用实时逆转录-聚合酶链反...
实时PCR(RT-PCR)是一种使用荧光染料或探针(实验室通常称为引物)技术对样品中存在的核酸进行定量的技术或实现靶基因/序列的扩增。RT-PCR足以扩增目标或模板DNA (cDNA是其中一种),也就是说,它可以在PCR仪器(热循环仪器)复制DNA。它使我们能够研究目标序列或基因,因此一直是遗传学中的一项关键技术。 (图3 RT-PCR...
由图可知,少量样本中的RNA经逆转录和PCR后可获得大量待测基因ORF1ab,从而进行准确检测,所以只需取少量样品即可检测是否感染新冠病毒。 (4)小问详解: 单克隆抗体的制备过程中经过两次筛选,第一次是筛选出能无限增殖的杂交瘤细胞,第二次是筛选既能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。由于单克隆抗体具有特异...
新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)法是目前核酸检测的主要方法,操作流程:采集样本→提取RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析
图1和图2所示新冠检测基本原理是:将新冠病毒RNA逆转录为DNA,采用多重荧光RT-PCR技术,因此荧光PCR法所用的试剂盒中通常都应该含有:逆转录酶、热稳定性DNA聚合酶(Taq酶)、TaqMan探针、引物、dNTP、Mg2+、缓冲剂系等。(2)由图2可知,引物、TaqMan探针能与模板链结合,因此,探针是依据新冠病毒RNA内部的一段序列(...
(2)在配置PCR扩增液时,加入的荧光探针序列 5'-TTGCT⋅m⋅⋅⋅⋅AGATT-3' ,如果模板中存在N基因序列,与探针结合的序列应该是5'-(&100)x=-3',如果某人没有感染新冠病毒,则PCR时DNA实时荧光信号强度填“增强”“减弱”或“不变”)。(3)我国前不久推出新冠病毒抗原检测的方法,相较核酸检测,方便...
(2)RT-PCR是先将新型冠状病毒的RNA逆转录成cDNA,然后再进行PCR(体外DNA复制),探针能与N基因序列特异性结合,由于DNA的结构为反向平行的两条链,5′与3′互补配对,因此与探针结合的序列应该是5′-AATCT……AGCAA-3′;PCR扩增时,荧光探针会被Taq酶切降解,使报告荧光基因和淬灭荧光基因基团分离,即每扩增一个DNA...
(逆转录聚合酶链式反应)的方法,RT-PCR的具体过程如图,下列叙述错误的是()mRNA3'AI35cDNA35B35ⅡA.PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶B.过程拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,理论上需要2个引物BC.该技术用于对某些微量RNA病毒的检测,可提高检测的灵敏度D.PCR反应中周期性的温度设置是特定的,与扩增...