实时PCR(RT-PCR)是一种使用荧光染料或探针(实验室通常称为引物)技术对样品中存在的核酸进行定量的技术或实现靶基因/序列的扩增。RT-PCR足以扩增目标或模板DNA (cDNA是其中一种),也就是说,它可以在PCR仪器(热循环仪器)复制DNA。它使我们能够研究目标序列或基因,因此一直是遗传学中的一项关键技术。 (图3 RT-PCR...
由图可知,少量样本中的RNA经逆转录和PCR后可获得大量待测基因ORF1ab,从而进行准确检测,所以只需取少量样品即可检测是否感染新冠病毒。 (4)小问详解: 单克隆抗体的制备过程中经过两次筛选,第一次是筛选出能无限增殖的杂交瘤细胞,第二次是筛选既能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。由于单克隆抗体具有特异...
(2)RT-PCR是先将新型冠状病毒的RNA逆转录成cDNA,然后再进行PCR(体外DNA复制),探针能与N基因序列特异性结合,由于DNA的结构为反向平行的两条链,5′与3′互补配对,因此与探针结合的序列应该是5′-AATCT……AGCAA-3′;PCR扩增时荧光探针被Taq酶切降解,使报告荧光基因和淬灭荧光基因基团分离,即每扩增一个DNA分子...
国际原子能机构与联合国粮食及农业组织合作帮助各国使用实时逆转录-聚合酶链反应应对病毒。 阅读原文:如何使用实时逆转录-聚合酶链反应检测新冠病毒? | IAEA 随着引起新冠疾病的冠状病毒在全球范围内传播,原子能机构与联合国粮食及农业组织(粮农组织)合作,提供支持和专门知识,帮助各国使用实时逆转录-聚合酶链反...
1.3 RT-PCR名词解释 预变性（Denaturation）是指DNA双螺旋结构中的碱基对氢键断裂，导致双链变为单链的过程。通过将双链DNA加热至94℃左右，使其在260nm波长处的紫外吸收值达到最大值，DNA的变性过程可以明显观察到。预变性有助于彻底解开DNA双链，并激活热稳定的DNA聚合酶。退火（Annealing）是在54-...
[摘要]目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法 与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量 RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法,同时对流感监测 点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果细胞培养病毒分 离的阳性数为26份,实时荧光定量RT-PCR的阳性数为36份,χ ...
答案见上1.选 B 过程①是由 mRNA形成单链DNA的过程,表示逆转 录,A正确;过程②③拟对单链cDNA进行n次循环的扩增, 根据DNA分子半保留复制特点可知,该过程理论上至少需 要 2^(n-1) 个引物B,B错误;利用实时荧光 RT-PCR技术对某 些微量RNA病毒进行检测时可提高检测的灵敏度,是因为 增加了待测 RNA逆转录产生...
新冠病毒是一种单链RNA病毒,常用“荧光RT-PCR技术”(实时荧光逆转录聚合酶链式反应)进行检测,如图1所示。该过程中当TaqMan探针完整时,荧光基团(R)发出的荧光信号被淬灭基团(Q)吸收而不发荧光;当探针水解释放出游离的R和Q,R发出的荧光信号被相应仪器检测到,荧光信号的累积与PCR产物数量完全同步。请分析并回答下列...
【结论】 实时荧光定量RT-PCR由于检测在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是3种方法中最为快速敏感的方法,适用于公共卫生应急疫情的实验室快速诊断。