实时荧光RT-PCR可用于新型冠状病毒的核酸检测,RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA聚合酶链式扩增反应相结合的技术,其原理是:在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合,探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团,新链延伸过程中,DNA聚合酶会破坏探针,导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT-PCR进行核酸检测...
荧光RT-PCK检测病毒核酸阳性是新型冠状病毒(+RNA病毒)感染确诊的标准。实时荧光RT-PCR核酸检测的基本原理:用特定的 TaqMan探针(单链小DNA片段,检测不到荧光)与待测基因序列结合,随着PCR 扩增反应的进行,TaqMan探针被具有外切酶活性的Taq酶切除水解并发出荧光,荧光强度反映扩增后待测基因的总量。原理如下图探针水解TaqMa...
如图为采用“实时荧光定量RT-PCR”技术检测新型冠状病毒核酸的基本流程,1～2h内即可得到检测结果。其基本原理是在DNA的复制过程中加入与特定模板链互补的荧光探针,这样
新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)法是目前核酸检测的主要方法,操作流程:采集样本→提取RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析。如图是RT-PCR两步法的过程图,在PCR扩增时加入能与目的基因(新冠病毒的核壳蛋白N基因)结合的荧光探针。目的基因合成越多,荧光信号越强,回答下列问题。(1...
现有第五版新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案中,关于确诊病例需要两个病原学证据之一,其一是呼吸道标本或血液标本实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性,其二是呼吸道或血液标本基因测序,与已知的新型冠状病毒高度同源。综合考虑时间、费用尤其是病患较多等诸多情况,前者对于已感染病患的确诊来说尤为重要。
新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)是目前核酸检测的主要方法,操作流程:采集样本→提取RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析。
新型冠状病毒的检测主要包含核酸检测、抗体检测、抗原检测等几种方法。其中利用实时荧光RT-PCR技术检测新型冠状病毒特异性核酸序列是最常用的方法。RT-PCR是将逆转录(R
检测新型冠状病毒核酸特异性序列的方法最常见的是实时荧光逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法。TaqMan探针是实时荧光定量RT-PCR技术中一种常用探针(如图1),其5
实时荧光RT-PCR技术是将逆转录(RT)、PCR以及荧光标记等相结合的技术,是检测新型冠状病毒核酸序列最常用的方法。其具体的过程为:从样品中提取RNA→cDNA→PCR扩增→荧光检测。回答下列问题:(1)RT-PCR操作过程中,所需的酶有___。PCR过程中温度的控制至关重要,需要依次设置不同的循环温度参数:95℃-30s、55℃-45...
结论:实时荧光RT-PCR方法检测SARS-CoV-2核酸是最有效的早期病原学诊断方式,COVID-19发病后1周内核酸检出率最高,核酸检出时间最晚是发病后38 d。 关键词:新型冠状病毒;新型冠状病毒肺炎;实时荧光RT-PCR 前言 2019年12月以来,武汉市出现...