按照最新指南,利用荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性仍然是确诊的金标准。新型冠状病毒实时荧光RT-PCR核酸检测基本原理,是根据病毒的核酸序列设计特异性的引物用于扩增对应的核酸片段,同时高度特异性的TaqMan探针可与对应的核酸片段进行结合,并在Taq酶外切酶活性作用下发生水解,产生荧光信号,根据荧光信号与扩增循环数之间的...
到目前执行的2020年3月3日国家卫生健康委发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》,实时荧光RT-PCR方法检测SARS-CoV-2核酸一直是疑似病例确定为确诊病例的病原学依据之一[6-8],也是确诊病例出院标准的重要参考,为SARS-CoV-2感染的...
新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)是目前核酸检测的主要方法,操作流程:采集样本→提取RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析。
实时荧光RT-PCR可用于新型冠状病毒的核酸检测,RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA聚合酶链式扩增反应相结合的技术,其原理是:在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合,探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团,新链延伸过程中,DNA聚合酶会破坏探针,导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT-PCR进行核酸检测...
(2)RT-PCR是先将新型冠状病毒的RNA逆转录成cDNA,然后再进行PCR(体外DNA复制),探针能与N基因序列特异性结合,由于DNA的结构为反向平行的两条链,5′与3′互补配对,因此与探针结合的序列应该是5′-AATCT……AGCAA-3′;PCR扩增时荧光探针被Taq酶切降解,使报告荧光基因和淬灭荧光基因基团分离,即每扩增一个DNA分子...
(2)进行PCR扩增时,需要加入设计好的一对引物。该“试剂盒”中加入的引物是根据新型冠状病毒RNA的序列设计合成的,能够与新型冠状病毒RNA通过碱基互补配对结合,因此只能专一性的扩增新型冠状病毒的核酸序列。 (3)从新冠肺炎康复者的血清中能够分离出相应抗体,这种方法属于传统的方法,具有产量低、纯度低、特异性差的缺点...
1、PCR原理:DNA受热变性后,打开DNA双链,每条DNA单链作为母链,以4种游离脱氧核苷酸为原料,合成子链,在引物作用下,DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链,即DNA的合成方向是从子链的5'端向3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。
荧光RT-PCK检测病毒核酸阳性是新型冠状病毒(+RNA病毒)感染确诊的标准。实时荧光RT-PCR核酸检测的基本原理:用特定的 TaqMan探针(单链小DNA片段,检测不到荧光)与待测基因序列结合,随着PCR 扩增反应的进行,TaqMan探针被具有外切酶活性的Taq酶切除水解并发出荧光,荧光强度反映扩增后待测基因的总量。原理如下图探针水解TaqMa...
目前广泛应用的新型冠状病毒检测方法是实时荧光RT-PCR技术。RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术,具体过程如图所示。下列说法错
现有第五版新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案中,关于确诊病例需要两个病原学证据之一,其一是呼吸道标本或血液标本实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性,其二是呼吸道或血液标本基因测序,与已知的新型冠状病毒高度同源。综合考虑时间、费用尤其是病患较多等...