实时荧光定量RT -PCR技术需要在常规PCR基础上添加荧光染料或荧光探针,荧光染料能特异性掺入DNA双链中,从而发出荧光信号。在新冠病毒肺炎疫情期间,可以通过实时荧光定量RT-PCR技术进行核酸检测。下列相关叙述错误的是( )A. 图中的探针可能是利用荧光分子标记的新冠病毒独特的基因序列 B. 核酸检测是通过检测荧光信号来...
实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过在PCR反应体系中加入荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,与DNA产物特异性结合,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,最终通过...
SYBR Green I 发出微弱的荧光,但一旦与双链 DNA 结合,嵌入至 dsDNA,荧 光大大增强。 因此,SYBR Green I 的荧光信号强度与双链 DNA 的数量相关,PCR 扩增 不同时期中,dsDNA 含量不同,SYBR Green I 荧光信号强度不同。可以根据荧 光信号检测出 PCR 体系存在的双链 DNA 数量,并可根据对照进行相关的计算 和...
新冠病毒核酸检测是目前筛查新冠感染者最精准、有效、低成本的技术方式。核酸检测主要用荧光定量RT-PCR技术,这种技术是RT-PCR技术与荧光定量PCR技术的结合。实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR)是通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为...
新冠病毒核酸检测主要用荧光定量RT-PCR技术,包括采集样本-提取RNA-合成DNA-加探针并扩增DNA(合成更多相同DNA的同时发出荧光)-结果分析。(1)新冠病毒的遗传物质的中文名称是 ___。其中储存的遗传信息是指 ___。(2)DNA在扩增过程中加的原料之一是dATP(A的含义表示该物质中含有腺嘌呤),其结构如图所示。该物质的元...
“实时荧光定量RT-PCR”是新冠疫情防控的一把利刃,通常在l～2h内即可得到检测结果。TaqMan探针是实时荧光定量RT-PCR技术中一种常用探针(如图1),其5末端连接荧光基团(R),3末端连接淬灭剂(Q)。当探针完整时,R发出的荧光信号被Q吸收而不发荧光。在PCR扩增过程中,当Taq酶遇到探针时会使探针水解而释放出游离的R和...
常用的PCR技术有实时荧光定量PCR、RT-PCR、重叠延伸PCR等,其中重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景。利用重叠延伸PCR技术进行定点突变可以实现对...
摘要:为建立鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法,对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针,使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY®-T1载体上构建重组质粒,提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制...
实时荧光定量PCR(Real time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)是在PCR扩增过程中,通过探针或者染料的荧光信号变化对PCR进程进行实时检测的技术。由于在PCR扩增的指数期,模板的Ct值和起始拷贝数存在线性关系,所以能够定量检测核酸。 由于Real-time qPCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快...