实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 是一种用于实时扩增和检测特定 DNA 或RNA 序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针,当与扩增的 DNA 或RNA 分子结合时会发出信号,从而可以对目标序列进行量化。RT-qPCR 通常用于基因表达分析、病毒载量定量和基因突变检测等应用。 RT-qPCR原理的三个主要步骤: 1、反转录: 1...
.实时荧光定量PCR技术的原理所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。该技术结合了实时定量PCR仪、实时荧光定量试剂、通用电脑和自动分析软件，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。
实时荧光定量PCR 原理 --- 标准曲线 模板DNA量越多,荧光达到域值的循环数越少,即Ct值越小 Log浓度与循环数呈线性关系,通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,根据样品Ct值,就可以计算出样品中所含的模板量 实时荧光定量PCR原理 绝对定量 确定未知样品的 C(t)值 通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其...
RT-PCR法的技术原理是采用双重PCR技术和Taqman探针技术相结合,针对样品的特异性序列设计引物和探针,通过监测不同荧光通道的荧光信号变化,检测MTB感染。该技术具有特异性强、灵敏度高、简便易行等优点。大量研究显示,RT-PCR技术在标本快速诊断中具有重要的临床价值。
下图为采用“实时荧光定量RT-PCR”技术检测新型冠状病毒核酸的基本流程,1~2h内即可得到检测结果。其基本原理是在DNA的复制过程中加入与特定模板链互补的荧光探针,这样每新合成一条DNA单链,就会产生一个荧光分子,通过检测荧光信号即可确定是否为阳性。下列相关说法正确的是( )A.①、②过程需要分别加入四种核糖核苷酸和...
RT-PCR过程中cDNA的合成为逆转录过程,需向装置中添加逆转录酶。 (2) 根据图示,RNA提取裂解液含有的蛋白酶K,可以促进病毒蛋白质的水解,起到灭活病毒的作用。采样后迅速进行病毒灭活,可以防止样本在运输和检测阶段造成病毒泄漏,以提高样本转运和检测阶段的安全性。步骤③是DNA的复制,需要热稳定的TaqDNA聚合酶催化,...
新冠病毒与现代生物技术 面对新冠疫情,最常见的检测方法是新冠病毒核酸检测,原理为实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR,RT—PCR)检测法,技术流程如图1所示,①②③④⑤表示相关步骤。 根据上述材料答下列问题: (1)步骤④需要的酶是___,引物A和引物B是根据___序列合成的。 (2)步骤③中引物A、引物...
1 下图为采用“实时荧光定量RT-PCR”技术检测新型冠状病毒核酸的基本流程,1~2h内即可得到检测结果。其基本原理是在DNA的复制过程中加入与特定模板链互补的荧光探针,这样每新合成一条DNA单链,就会产生一个荧光分子,通过检测荧光信号即可确定是否为阳性。下列相关说法正确的是( )A.①、②过程需要分别加入四种核糖核苷酸...