那么,在进行 LC3 检测实验之前时,需要了解哪些信息呢? 首先,需要知道样本的LC3表达量和表达的种类。不表达或者表达量很低样本,就不适合用于自噬的研究。 其次,LC3-I和II存在一个生成-降解的动态过程。自噬小体有一个生成、融合、降解的过程,即“自噬流”。所以,单时间点LC3-II的表达量改变并不能体现自噬状态,...
目前的LC3抗体所检测的抗原表位都位于LC3的N端,由于PE基团结合可能导致N端区域的构象变化,使得抗体对LC3-II的亲和性更高,所以LC3-II条带显色深并不能代表该样本处于高自噬状态。 在半定量时,除了使用LC3-II/LC3-I的比值外,也有科学家使用LC3-II与管家蛋白(Housekeeping Protein)的比值进行半定量。 图5 CST LC3...
要检测自噬的活性,常常使用LC3 (Microtubule-associated protein 1 light chain 3)作为标志物。下面将介绍LC3检测的要点。 1. LC3 I和LC3 II:LC3是一种在自噬过程中参与的蛋白质。它存在两种形式:LC3 I和LC3 II。LC3 I是未修饰的形式,而LC3 II是经过磷酸化和脂化修饰的形式。LC3 II在自噬过程中会转移到自噬...
进行LC3检测时，首要任务是评估样本的表达类型和量。对表达量低或不表达LC3的样本，自噬研究的结论可能不准确。LC3的动态平衡是关键，自噬小体的生成、融合和降解需要通过药物干预（如氯喹、巴佛洛霉素A1）来观察。通过阻断溶酶体功能，可以观察在不同条件下的LC3-II积累和比值变化，判断自噬程度。LC3-I的...
LC3检测要点包括样本表达、特殊处理与药物抑制、结果分析、膜相关蛋白处理和小分子蛋白分析。样本表达上，LC3在不同组织细胞中有差异性表达，主要研究LC3A与LC3B，它们在大脑、脑内分泌组织中表达较高，其他组织表达较低。特殊处理与药物抑制是评估自噬程度的关键，需要观察药物作用下的自噬变化。结果分析时需...
总结:在自噬体形成过程中,胞浆定位的LC3-I与PE结合并插入到自噬体的双层膜中形成LC3-II。 LC3 检测要点 01 样本表达 在哺乳动物中,存在 4 种LC3 同工型(LC3A、LC3B、 LC3B2和 LC3C),在不同的组织细胞中表达会有差异。 目前主要研究的是LC3A...
因而,LC3蛋白水平被用来作为自噬评价和测定的公认指标,当与溶酶体抑制剂联用时,可以量化自噬流(一定时间内自噬过程发生的强度)。 总结:在自噬体形成过程中,胞浆定位的LC3-I与PE结合并插入到自噬体的双层膜中形成LC3-II。 LC3 检测要点 01样本表达 在哺乳动物中,存在 4 种LC3 同工型(LC3A、LC3B、 LC3B2和 ...