1.在进行多种细胞培养操作时,所用器具要严格区分,最好作上标记便于辨别。按顺序进行操作,一次只处理一种细胞,多种细胞多种操作一起进行时易发生t昆乱。 2.在进行换液或传代操作时,粘有细胞的移液枪头和移液管不要触及试剂瓶瓶口,以免把细胞带到培养基中污染其他细胞。 3.所有细胞一旦购置,或从别处引入,或自...
1. 先观察培养基颜色以及是否有漏液情况,再在倒置显微镜下观察细胞状态,并对细胞进行不同倍数拍照,排除细胞本身污染或状态不好的情况; 2. 确认细胞状态正常后将细胞瓶外壁消毒,放在培养箱静置数小时 (根据细胞密度定) 以稳定细胞状态; 3.1 贴壁细胞:细胞生长密度超过 80% 时,可根据情况传代,若细胞未超过80%汇...
(2)杀菌到时后,进入细胞间,穿好实验服,戴上口罩与乳胶手套。(3)关闭紫外,培养液转入超净台前先喷洒酒精。(4)酒精棉擦手后,先在超净台中取 9、出10 mL含血清培养液,置于15 mL离心管中待用。(5)准备一杯37 °C左右的温水,将细胞取出液氮罐,放入温水中。(6)用镊子夹住冻存管,轻轻摇晃,使其快速溶解。
细胞传代培养操作步骤如下:(1)传代前在倒置显微镜下观察细胞形态和生长密度,当细胞生长密度达到80%~90%时,即可进行传代。(2)吸掉或倒掉培养瓶内的培养液。加入PBS清洗1~2次,左右轻轻摇晃后弃掉。(3)根据培养瓶大小向瓶内加入适量含EDTA的胰蛋白酶,一般应覆盖整个培养瓶底。(4)把培养瓶放入37℃ CO2...
细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 1. 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。
1. 冷冻细胞之活化原则为快速解冻,以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害,导致细胞之死 亡。 2. 细胞活化后,约需数日,或继代一至二代,其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生 单株抗体或是其它蛋白质)。 3. 材料 3.1 37 oC 恒温水槽 3.2 新鲜培养基 ...
CO2:一般需要在专用的二氧化碳培养箱中培养,设置为5% CO2。温度:大部分哺乳动物细胞培养温度为37°C。禽类细胞在38.5°C生长最佳。昆虫细胞最佳生长温度是27°C。冷血动物细胞系可在15-26°C范围内培养。细胞培养容器:大多数细胞系在专用的细胞培养瓶上生长,不需要特殊的基质等。但一些细胞,特别是原代细胞,...
1. 细胞处理后的第二天,在显微镜下观察细胞状态,如死细胞较多且细胞密度较低,需要进行换液操作。(1)悬浮细胞请在高倍镜下观察,一般而言,活细胞轮廓圆润、界限清晰、透明度大、折光性强。如细胞活率较高,则继续正常培养。(2)贴壁细胞如观察到较多细胞漂浮,请在高倍镜下观察,判断漂浮着的细胞是死细胞...
冻存是将细胞放在低温条件下进行保存,以延长细胞的保存时间。复苏则是将冻存的细胞取出,加入新的培养基中进行培养。冻存和复苏时需要采用适当的保护剂,如二甲基亚砜(DMSO)等,以降低冰晶的形成对细胞的损伤。同时,冻存和复苏的操作也需要严格控制温度和时间,以保证细胞的存活率。总之,细胞培养是一项技术性很...