细胞传代需要注意分板比/接种密度。不同的细胞系通常需要满足特定的分板比/接种密度，务必查看所用细胞系的培养指南。生长较快的细胞可能需要高分板比（低接种密度），而生长缓慢的细胞可能需要低分板比（较高接种密度）。如果细胞长时间无人看管（例如公共假日或周末），建议使用低于正常水平的分板比
2. 消化分离 消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞,以利于进一步的培养,常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。 3. 培养 细胞悬液用计数板进行细胞计数。用培养液将细胞数调整为(2～5)×105 cells/ml,或实验所需密度,分装于培养瓶中,使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。置...
（4）把培养瓶放入37℃ CO2培养箱进行消化，2~5min后拿出放在倒置显微镜下进行观察，当发现有70%~80%细胞收缩变圆、细胞间隙变大时，再轻轻拍打培养瓶使剩余细胞脱落，然后立即加入2倍胰蛋白酶量的培养液中止消化，使用吸头轻轻吹打，混合均匀，以防消化过度。（5）吸出所有细胞悬液至离心管内，1000rpm/min离心...
1.先观察培养基颜色以及是否有漏液情况,再在倒置显微镜下观察细胞状态,并对细胞进行不同倍数拍照,排除细胞本身污染或状态不好的情况; 2.确认细胞状态正常后将细胞瓶外壁消毒,放在培养箱静置数小时(根据细胞密度定)以稳定细胞状态; 3.1贴壁细胞:细胞生长密度超过 80% 时,可根据情况传代,若细胞未超过80%汇合度时,...
冻存是将细胞放在低温条件下进行保存，以延长细胞的保存时间。复苏则是将冻存的细胞取出，加入新的培养基中进行培养。冻存和复苏时需要采用适当的保护剂，如二甲基亚砜（DMSO）等，以降低冰晶的形成对细胞的损伤。同时，冻存和复苏的操作也需要严格控制温度和时间，以保证细胞的存活率。总之，细胞培养是一项技术性很...
1.1.1 准备一个10cm的细胞培养皿并做好标记,预热好的细胞完全培养基,一支15ml离心管。 1.1.2 取出细胞冻存管,在37°水浴中快速解冻(观察到有液体流出即可),将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。 1.1.3 取1ml培养基到冻存管内(缓慢滴加),混匀。将细胞悬液转移到离心管中,1000转离心5min。
2、操作步骤如下: (1)手套喷洒酒精,从培养箱(37 ℃、5 %CO2)中拿出细胞,显微镜下观察细胞生长状态; (2)将细胞放置生物安全柜上,弃去培养基上清,然后用PBS洗涤两次(每次2 mL); (3)加入2 mL胰酶消化液,立即盖好盖子,37 ℃、5 %CO2 培养箱中孵育2 min; ...
1. 实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。每 次操作只处理一株细胞株,且即使培养…
每三天更换一次培养基。约14-20天内形成球体后,收集肿瘤球体于15 mL离心管中,并以1300 rpm离心3mins,然后用PBS清洗。加入1 mL 胰酶消化液,轻轻吹打3 mins,直到球体破裂形成单细胞细胞悬浮液。 图1. 喉癌肿瘤球显微镜下的形态 (a)原发性喉癌细胞在含F...
细胞培养操作步骤 1.准备培养基和培养器具：选择适合细胞生长的培养基，如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium），RPMI 1640（Roswell Park Memorial Institute 1640）等。准备培养器具，如细胞培养瓶、组织培养皿、离心管等。2.培养器具的消毒：将培养器具放入70%的乙醇或漂白水中浸泡约15-30分钟，然后用无菌PBS（...