【目的】通过构建过表达T7 RNA聚合酶(T7 RNA polymerase, T7 RNAP)的慢病毒系统,建立可稳定表达T7 RNA聚合酶的BHK-21细胞株。 【方法】根据GenBank中公布的大肠杆菌BL21(DE3)基因组中T7 RNA聚合酶基因序列设计引物,并使用PCR扩增目的基因片...
稳定表达T7RNAP的BHK-21细胞系的建立
BHK-21细胞为建立能稳定表达T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的BHK-21细胞系以研究RNA重组疫苗,本研究从BL21(DE3)大肠杆菌中扩增T7 RNAP基因,定向克隆于质粒pcDNA3.1(+)中,经双酶切及测序鉴定,获得阳性重组质粒pcDNA3.1-T7 RNAP.用该质粒转染BHK-21细胞,经G418筛选14 d后获得阳性细胞株.RT-PCR和western blot检测...
12、采用稳定表达t7 rna聚合酶的bhk-21细胞系为基础的体外rv拯救方法的建立是建立高效体外rv拯救系统的基础,因此,本发明所建立的稳定表达t7 rna聚合酶的bhk-21细胞系能够应用于拯救各种基因型的牛轮状病毒、稳定表达zsgreen的牛轮状病毒报告病毒、猴轮状病毒、猪轮状病毒或人轮状病毒等方面。 13、相应的,本发明...
吉林大学人兽共患病教育部重点实验室,吉林长春130062)摘要:设计1对特异性引物扩增痘苗病毒VTF7-3株的T7RNA聚合酶基因并连接真核表达载体,利用Lipo-fectamineTM2000将重组质粒转染BHK-21细胞,G418筛选2周后,转入验证质粒pT7-HN,经Western-blot和间接免疫荧光鉴定后证实获得了1株能稳定表达T7RNA聚合酶的VT7细胞系...
4、按照权利要求3的用途,其特征在于:所述的正链RNA病毒包括猪瘟病毒等。 说明书 <p>技术领域 本发明涉及ST细胞系,尤其涉及一株能够稳定表达T7RNA聚合酶的ST细胞系,本发明还涉及该细胞系的构建方法及其应用,属于生物技术领域。 背景技术 十余年前,在分子病毒学研究领域兴起了一种反向遗传操作技术,即病毒的感染性...
通过WB检测出不同代次的阳性细胞中均能稳定表达目的基因T7 RNA聚合酶.[结论]T7 RNA聚合酶能顺利在真核细胞内表达,并在此基础上建立的稳定细胞系为RNA病毒体内拯救技术平台的建立奠定了基础.%[ Objective ] The aim of this study was to establish the BHK-21 stable cell lines expressing T7 RNAP and ...
细胞系聚合酶睾丸rnap表达egfp 稳定表达T7RNA聚合酶的猪睾丸细胞系的建立收稿日期:2012-04-16基金项目:甘肃省科技计划项目(1008FCCA006);甘肃省科技计划项目(1104NKCA167)作者简介:祁光宇(1978-),男,助理研究员,硕士,研究方向为分子病毒学与免疫学。E-mail:qiguangyu0931@126.com*通讯作者:**荣,副研究员,研究...
用此重组质粒转染293T细胞,WB可检测出瞬时表达的T7RNAP蛋白;利用辅助质粒对表达T7的非复制型Lenti-virus病毒进行体外包装,所获得的非复制型Lenti-virus病毒感染BHK-21细胞,利用GFP通过流式细胞分选仪筛选表达T7的细胞系,并利用WB检测基因的表达。[结果]通过WB检测出不同代次的阳性细胞中均能稳定表达目的基因T7...
所获得的非复制型Lenti-virus病毒感染BHK-21细胞,利用GFP通过流式细胞分选仪筛选表达T7的细胞系,并利用WB检测基因的表达.[结果]通过WB检测出不同代次的阳性细胞中均能稳定表达目的基因T7 RNA聚合酶.[结论]T7 RNA聚合酶能顺利在真核细胞内表达,并在此基础上建立的稳定细胞系为RNA病毒体内拯救技术平台的建立奠定...