共患病教育部重点实验室,吉林长春130062 ) 摘要:设计1对特异性引物扩增痘苗病毒VTF7-3株的T7RNA聚合酶基因并连接真核表达载体,利用Lipo- fectamine TM 2000将重组质粒转染BHK-21细胞,G418筛选2周后,转入验证质粒 pT7-HN,经Western-blot和间接 免疫荧光鉴定后证实获得了1株能稳定表达T7RNA聚合酶的VT7细胞系...
设计1对特异性引物扩增痘苗病毒VTF7-3株的T7RNA聚合酶基因并连接真核表达载体,利用Lipo-fectamineTM2000将重组质粒转染BHK-21细胞,G418筛选2周后,转入验证质粒pT7-HN,经Western-blot和间接免疫荧光鉴定后证实获得了1株能稳定表达T7RNA聚合酶的VT7细胞系.构建的VT7细胞系传30代还能够稳定的表达T7RNA聚合酶,为...
试验结果表明,稳定表达t7 rna聚合酶的bhk-21-t7细胞系或单克隆细胞株的构建是rv高效反向遗传系统的关键。 12、采用稳定表达t7 rna聚合酶的bhk-21细胞系为基础的体外rv拯救方法的建立是建立高效体外rv拯救系统的基础,因此,本发明所建立的稳定表达t7 rna聚合酶的bhk-21细胞系能够应用于拯救各种基因型的牛轮状...
1、一株稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系ST/T7,其微生物保藏号是:CGMCC No.2444。 2、一种构建权利要求1所述细胞系ST/T7的方法,包括:将T7RNA聚合酶基因定向插入到真核表达载体pIRES2-EGFP的XhoI和BamHI位点之间,得到带有新霉素抗性基因、绿色荧光蛋白和T7RNA聚合酶基因的三顺反子表达载体pIRES2-EGFP-T7;用pI...
[目的]建立具有绿色荧光标记的表达T7RNA聚合酶的稳定细胞系。[方法]从BL21(DE3)大肠杆菌中克隆出T7RNAP基因,定向克隆进质粒FG12后,构建了表达T7RNA聚合酶基因(T7)的Lenti-virus重组质粒FG12-T7RNAP。用此重组质粒转染293T细胞,WB可检测出瞬时表达的T7RNAP蛋白;利用辅助质粒对表达T7的非复制型Lenti-virus病...