消减杂交(subtractive hybridization,扣除杂交) 是指利用不同组织、细胞或不同状态下组织、细胞基因表达的差异性,并结合核酸杂交建立的克隆差异表达基因的技术。是差别杂交的改进,用过量的参照细胞的mRNA 或CDNA 与目的细胞的CDNA 或mRNA (目的序列) 杂交,形成的RNA CDNA 杂交体是两种细胞共有的,将其扣除。剩下的CDN...
抑制消减杂交（SSH）技术为研究这种差异表达基因提供了一种强大的手段。通过构建在抗病和感病状态下小麦基因表达的消减文库，我们能够挖掘出那些在抗病反应中起关键作用的基因，这对于揭示小麦抗病的分子基础和培育抗病品种具有极其重要的意义。二、材料与方法 （一）植物材料与病原菌处理 小麦品种选择 选用对特定病原菌...
SSH （抑制消减杂交）是利用抑制性PCR 能选择性指数扩增不同丰度差异基因和cDNA 消减杂交建立起来的方法,运用了杂交二级动力学原理即高丰度序列退火时产生同源杂交的速度大于低丰度序列,使原本在丰度上有差异的DNA 序列的相对含量趋于一致。然后利用抑制性PCR 链内退火优于链间退火的特点,使两端接上同一接...
我们使用基于抑制设备消减杂交法(SSH)结合镜实现这一目标方向选择(MOS)。这项技术使我们能够确定具体很少表达镉诱导性基因(Diatchenko等人,1996; Rebrikov等人,2000)。我们还通过cDNA微阵列作为杂交的反向Northern blot分析而达到消灭假阳性克隆,并提高选择效率的一种形式。Addi-倚重,诱导姬松茸镉基因暴露后为通过实时逆...
解析 抑制性消减杂交与传统的新基因克隆方法相比,具有敏感性高,假阳性率低等特点,且有效地分离扩增低丰度特异表达的基因,另外实验周期短、易操作,熟练者能在7~14天内构建成消减文库,获得差异表达基因,且其费用又大大低于基因芯片,并能克隆出新的疾病相关基因,这些优点使得此项技术自一建立就受人们的广泛关注。
目前已经有很多分子生物学技术可用于研究基因表达差异,其中Diatchenko L等1996年建立的抑制性消减杂交法( Suppression Subtractive hybridization, SSH)以其假阳性率低、灵敏度高、低背景、重复性强和检测范围广等优点迅速得到广泛应用,已成功用于不同细胞株、不同器官组织、个体不同发育阶段以及机体在外界因子作用下差异...
抑制性消减杂交技术是一种以抑制性PCR反应为基础,将标准化测试cDNA单链步骤和消减杂交步骤合为一体的技术。通过合成两个不同的接头,接于经限制性内切酶消化后的测试cDNA片段的5’末端,将测试和驱动进行两轮杂交。所谓抑制性PCR是利用链内退火优于链间退火,使非目的序列片段两端的长反向重复序列在退火时产生“锅柄样...
(一)cDNA代表性差异分析方法(cDNA RDA)基因组消减杂交方法是cDNA RDA建立的工作基础,所谓基因组消减杂交就是为了从两种相关的DNA样本(检测DNA和驱动DNA)中分离出检测DNA所具有的特异性序列,一定量的检测DNA(TesterDNA)与过量的驱动DNA(Driver DNA)进行杂交,使检测DNA中与驱动DNA相同的大部分序列发生杂和性复性,而检...
抑制差减杂交（SSH）SSH是一种基于抑制PCR和差减杂交技术建立的,在转录水平上研究基因表达的技术。• 抑制性消减杂交—原理 杂交动力学 不同丰度的单链DNA得到均衡 抑制性PCR 目的基因得到富集 4 • 杂交动力学 抑制差减杂交技术运用了杂交二级动力学原理,即高丰度的单链cDNA在退火时产生同源杂交的速度快于低...
抑制消减杂交法(SSH)是一种新的以PCR反应为基础的cDNA消减杂交方法。它是通过合成两个不同的接头,连接于经限制性内切酶消化后的cDNA片段的5’端,达到选择性扩增目的cDNA片段,同时抑制非目的cDNA的扩增。 其优点是: 1.可有效分离高、低丰度的差异表达基因。 2.技术方法简单,成熟,易操作。 3.灵敏度高。 4.重复...