抑制差减杂交（SSH）SSH是一种基于抑制PCR和差减杂交技术建立的,在转录水平上研究基因表达的技术。• 抑制性消减杂交—原理 杂交动力学 不同丰度的单链DNA得到均衡 抑制性PCR 目的基因得到富集 4 • 杂交动力学 抑制差减杂交技术运用了杂交二级动力学原理,即高丰度的单链cDNA在退火时产生同源杂交的速度快于低...
抑制性消减杂交技术 正确答案 是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术,其原理是以抑制性多聚酶链反应(PCR)反应为基础的cDNA消减杂交技术。通过合成两个不同的接头,连接于测试cDNA片段的5′末端,达到选择性扩增差异性表达的cDNA片段,抑制非目的cDNA的扩增。该技术是Diatchenko等1996年在抑制性PCR的基础上建立...
抑制性消减杂交技术更适合差异表达的新基因的克隆化. 此外还有以下一些特点: (1)在分离稀少基因方面具有优势: cDNA消减杂交、代表性差异分析、mRNA差异显示方法都不能分离到低丰度的差异表达基因. 而抑制消减杂交技术对高、低丰度的差异表达基因都能有效分离. 这一重要优点主要归功于均等(normalization)过程, 实验证明...
抑制性消减杂交技术在对虾基因克隆中的应用 抑制性消减杂交技术是一项筛选、分离未知差异表达基因的试验方法,该技术具有快速、简便、灵敏、特异、高效,所需起始样本量较少等优点.利用该技术构建对虾组织消减cDNA文库,鉴定差异表达相关基因及其表达特性.通过对对虾差异性表达的免疫相关基因、抗病基因及其他性状基因的了解,旨...
抑制差减杂交技术运用了杂交二级动 力学原理,即高丰度的单链cDNA在退 火时产生同源杂交的速度快于低丰度 的单链cDNA,在试验组(tester)和驱动 组(driver)的cDNA变性后再复性的过 程中,原来在丰度上有差别的单链 cDNA达到均一化。 • 采用两次消减杂交和两次PCR,保证了高特异性; ...
amethodforgeneratingdifferentiallyregulatedor tissue-specificcDNAprobesandlibraries August19,20123 • 不同丰度的单链DNA得到均衡杂交动力学 目的基因得到富集抑制性PCR August19,20124 • 采用两次消减杂交和两次PCR,保证了高特异性; 通过杂交操作,可以获得低丰度差异表达基因; 使用SMARTer™PCRcDNASynthesisKit(63492...
目前已经有很多分子生物学技术可用于研究基因表达差异,其中Diatchenko L等1996年建立的抑制性消减杂交法( Suppression Subtractive hybridization, SSH)以其假阳性率低、灵敏度高、低背景、重复性强和检测范围广等优点迅速得到广泛应用,已成功用于不同细胞株、不同器官组织、个体不同发育阶段以及机体在外界因子作用下差异...
(5)对克隆出的片段进一步分析鉴定:包括用二次PCR产物制备探针,经点杂交筛选阳性克隆;以插入cDNA片段为探针进行Northern blot鉴定差异表达;cDNA序列测定,序列同源性分析;通过文库筛选或步移技术获取完整的差异表达基因全长。 抑制性消减杂交技术较以往差异基因克隆方法有了重要改进,具有三者无法比拟的优点:(1)高度的特异...
抑制性消减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)是利用PCR 反应链内退火优先于链间退火的特点和分子杂交二级动力学原理,经过体系不断优化建立起来的快捷、有效地差异基因筛选方法,具有低丰度mRNA 富集效率高、假阳性低、灵敏度高、重复性好等特点。现已广泛应用于动植物发育和分化、疾病易感性差异、抗药性差异...