慢病毒载体(Lentiviral vectors, LVs)是在人免疫缺陷病毒(HIV-1病毒)基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(或RNAi)导入动物和人的原代细胞或细胞系,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。 慢病毒载体基因组是单股正链RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA,形成DNA整...
在用CRISPR/CAS9系统筛选病毒新受体时,必须使用双慢病毒载体,也就是说CAS9基因和sgRNA编码基因必须在两个慢病毒载体上;而定点敲除时,CAS9基因和sgRNA编码基因在同一个慢病毒载体上。 CAS9稳转细胞的构建 实验流程制备慢病毒穿梭质粒及辅助包装质粒,用无内毒素的试剂盒抽提,共转染 293T 细胞,转染后 18小时后更换为完...
一、慢病毒简介 慢病毒,即拉丁文中的"Lentus",意为“慢”,得名自其病程缓慢而逐渐进展的特性。作为逆转录病毒家族的一员,慢病毒以其在宿主体内引发退行性疾病的缓慢进展而著称。其特征包括具有包膜的单链RNA病毒,直径约为80-100 nm。慢病毒表现出强烈的宿主特异性,例如,牛免疫缺陷病毒(BIV)仅感染牛,而猫免疫...
一、慢病毒包装步骤 1.实验材料准备：无血清基础DMEM培养基，完全培养液，病毒载体，质粒psPAX2，质粒pMD2.G，293T细胞，PEI转染试剂，灭菌离心管，无菌病毒管，0.22μm 滤膜，96孔板，细胞计数板，移液器，超速离心机，-80℃冰箱，细胞培养箱等。2.细胞传代：293T细胞复苏并传2-3代，将细胞分至培养基中，...
1.什么是慢病毒 慢病毒的英文是Lentivirus,它的命名有两层意思,一方面Lenti-在拉丁文中有慢的意思;另一方面慢病毒感染患者早期很难观察,大多都会经历一个长达数年的潜伏期,之后会缓慢发病,因此这些病原微生物被称之为慢病毒。它是逆转录病毒科下的一个属,其主要...
2.病毒的稀释 如需稀释病毒，可以先将病毒冰浴融化，再用PBS或不含血清的培养基稀释混匀后4℃保存，为保证病毒滴度，建议在3天内使用完毕。慢病毒的使用 1.预实验摸索慢病毒的最佳MOI 每种细胞对慢病毒的敏感性不同，同时每种慢病毒载体荧光强度也有差异，所以在正式实验前需要通过预实验确定慢病毒对细胞的感染...
慢病毒载体(Lentivirus)是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,是逆转录病毒的一种,基因组是RNA,其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达,具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。 慢
慢病毒载体 慢病毒载体是以HIV-1为基础发展起来的基因治疗载体，具有较广的宿主范围，能有效感染分裂期和非分裂期的细胞。它可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，实现目的基因的长期、稳定表达。慢病毒载体基因递送和表达的特点 01感染谱广可有效感染肿瘤细胞、神经元、心肌细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型细胞...
慢病毒包装实验步骤 一、实验材料1. 慢病毒载体慢病毒载体：该病毒包装系统为三质粒系统，组成为pspax2, pMD2G, pLVX-CMV-EGFP-gene或者pLKO-U6-shRNA-EGFP-puro。其中pspax2, pMD2G是辅助质粒，另一个是骨架载体，骨架载体上的EGFP能表达绿色荧光蛋白（GFP），过表达的基因以及敲低序列shRNA均构建在慢病毒...
MOI=（病毒滴度x病毒体积）/细胞数目 2、如何确定向细胞中加入慢病毒的最佳时间？慢病毒感染细胞后2~3天可观察慢病毒携带的基因荧光表达情况，在细胞汇合度30~50%且细胞状态良好时加入慢病毒，确保在感染后2天时细胞增长达到70%左右的汇合度。3、用于慢病毒感染的细胞接种量是多少？根据细胞增殖的速度调整细胞接种...