①瞬时转染:这种方法所需时间较短,但对于某些难以转染的肿瘤细胞,转染效率较低,并且只能在细胞内维持3-5天,最多约一周。 ②稳定转染:对于长期基因表达,实验室最常采用且具高可行性的方法是慢病毒转染(Lentiviral Transduction)。通过慢病毒转染技术,可以将目的基因整合到宿主细胞的基因组中。虽然这种方法所需时间更...
CRISPR慢病毒转染法是一种高效引入CRISPR基因编辑系统到目标细胞中的技术,旨在实现对基因的有针对性编辑或调控。 实验步骤: 1、质粒构建:构建好含有CRISPR-Cas9系统的质粒,其中包括lentiCRISPR-sgRNA。该质粒携带sgRNA序列,可指导Cas9蛋白准确识别并切割目标基因(之前已详细描述过)。
2、慢病毒包装质粒:准备慢病毒包装质粒,其中包括pCMV-VSV-G(携带包膜蛋白)和pCMV-dR8.2 dvpr(携带包装蛋白)。这两者协同作用,使得慢病毒能够高效地传递CRISPR-Cas9系统到目标细胞内。 3、细胞培养:使用适宜的培养基培养目标细胞,通常选择293T细胞,以确保细胞处于最佳的生长状态。 4、转染试剂准备:在进行转染前,将...
首先,咱们得看看这个流程图。图一展示的是用慢病毒有效感染肠道类器官的关键步骤。简单来说,就是先把肠细胞和慢病毒放在一起孵育,然后再把这些细胞重新嵌入到基质凝胶中。36小时后,你会发现几乎100%的新形成的肠道类器官都是GFP阳性的!是不是很惊人? 高效基因转导 💉 接下来是图二,展示了如何用慢病毒高效地转...
在转染过程中，可以加入polybrene来提高病毒转染效率，但需要注意优化最佳浓度，通常在2–12 μg/ml范围内。转染前需确保细胞状态良好，收毒时间不宜过早，通常建议在转染后48小时以上再进行收毒。实验时，可设定培养皿中的细胞密度为4–5 x 10^6 cells/10 cm。若细胞分裂速度过快，可适当减少铺板细胞数量。建议...
慢病毒转染原理。 慢病毒转染的原理主要包括以下几个步骤,首先,将外源基因插入慢病毒载体中,构建成慢病毒表达载体;然后,将慢病毒表达载体转染至包装细胞中,利用包装细胞的辅助病毒蛋白包装慢病毒颗粒;最后,将包装好的慢病毒颗粒用于感染目标细胞,外源基因被整合入宿主细胞基因组中,实现稳定表达。 慢病毒转染步骤。 慢病...
深入探究 TFF3 基因慢病毒转染 A549 细胞后对 NF-κB 的作用，对于揭示肺癌发病深层机制、挖掘潜在治疗靶点意义非凡，有望为肺癌精准医疗开辟新路径。一、肺癌与 A549 细胞模型概述 （一）肺癌流行病学现状 肺癌发病率在全球范围内呈持续上升态势，大量流行病学数据表明，吸烟、空气污染、职业暴露等诸多因素均为肺癌...
我们常用的细胞转染方法有电穿孔法、显微注射、基因枪、脂质体转染,磷酸钙共沉淀法、原生质体转染、病毒介导的转染。 01 实验材料 无血清培养基、MEM-α或DMEM、polybrene、慢病毒 02 实验步骤 1. 贴壁细胞 (1)慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×105/孔铺到24孔板中。使细胞在...
CRISPR-Cas9慢病毒转染是一种高效将CRISPR基因编辑系统引入目标细胞的技术,实现对基因的精准编辑或调控。以下是详细的实验步骤: 质粒构建 🧬 首先,构建含有CRISPR-Cas9系统的质粒,包括lentiCRISPR-sgRNA。这个质粒携带sgRNA序列,能够指导Cas9蛋白准确识别并切割目标基因。