且这一方法不受起始样本量限制,低至单细胞裂解释放的 RNA 都可以进行 rRNA 去除。 3. 当 RNA 起始量较低时,测序所需的数据量也不必过高,每个样本单独构建文库既浪费建库试剂,又增加了操作时间。本方案支持 8—24 个 cDNA 混合建库,只要将不同样本反转录得到的 cDNA 混合纯化,构建一个混合 RNA-seq 文库即可。
非常重要的一点,添加分子标签(UMIs):在文库制备过程中,通过逆转录步骤(在PCR扩增之前)添加8 nt UMI,可以灵敏地识别PCR重复片段并校正PCR扩增错误,从而进行正确的样本数据回溯,提供更可靠的RNA-Seq分析! ■ 产品列表 Code No. 产品名称 包装量 634354 SMART-Seq® Total RNA Pico Input with UMIs (ZapR™ Mam...
Smart-seq2技术有较好的覆盖范围,可检测到稀有转录本,无需额外的专业设备,应用范围较广,可以解决传统 RNA 定量技术在早期胚胎发育、干细胞、癌症、免疫等研究领域中存在的样品量极低或细胞异质性的问题,是在单细胞水平研究基因表达强有力的工具,极大地拓展了RNA-seq 的应用范围。 技术优势: (1)起始量低:1-1000...
最早期的RNA-seq存在的严重缺点就是没有保留链特异性,这使得对基因表达水平(特别是重叠基因)进行量化变得十分具有挑战性。本研究中使用的3种产品都是链特异性的,其中Illumina TruSeq Stranded RNA文库试剂盒使用 dUTP 标记来降解第二条链;现属于IDT埃德特公司的两款RNA试剂盒都是基于Adaptase专利技术,通过仅产生一条...
Smart-seq2技术有较好的覆盖范围,可检测到稀有转录本,无需额外的专业设备,应用范围较广,可以解决传统 RNA 定量技术在早期胚胎发育、干细胞、癌症、免疫等研究领域中存在的样品量极低或细胞异质性的问题,是在单细胞水平研究基因表达强有力的工具,极大地拓展了RNA-seq 的应用范围。
Smart-seq2技术有较好的覆盖范围,可检测到稀有转录本,无需额外的专业设备,应用范围较广,可以解决传统 RNA 定量技术在早期胚胎发育、干细胞、癌症、免疫等研究领域中存在的样品量极低或细胞异质性的问题,是在单细胞水平研究基因表达强有力的工具,极大地拓展了RNA-seq 的应用范围。
N6-腺苷酸甲基化(N6-methyladenosine, m6A),作为RNA重要的表观修饰方式之一,在近年受到很高的重视,成为国自然的热门和CNS期刊的热点,是真核生物mRNA和lncRNA上最丰富的一种修饰,参与细胞分化、胚胎发育、环境应激和各种疾病的发生发展等过程...
近年来,笔者在科研服务中也做了成百上千例微量样本。总结来说,微量样本除了在miRNA研究上测序略胜一筹外(miRNA测序也是采用了比较特殊的建库方式),其他mRNA,lncRNA,circRNA等方面,测序是比不上芯片的。 RNA-seq建库过程比较复杂,加接头,纯化等各种操作会出现损失,根据笔者的经验,1ug的动物total RNA,进行polyA-RNA...
典型的实验需要从研究样本中分离 RNA 并反转录成 cDNA 文库,然后进行下一代测序(NGS)和生物信息学分析。RNA-seq 文库制备方法的选择取决于几个因素,例如成本、RNA 质量和 RNA 建库起始量。高性价比的RNA微量建库方法特别令人感兴趣,因为成本、时间和材料是高通量基因表达实验中的关键限制因素。
07:11 单细胞及微量核酸扩增及测序方案选择 07:30 靶向测序方法选择 02:57 低至单拷贝核酸的定量方案 07:57 基于MDA的单细胞微量核酸扩增 08:23 微量核酸NGS研究策略 08:28 微量组织细胞核酸提取 13:55 微量RNA的NGS研究策略 13:00 微量RNA如何获得更精准的荧光定量结果 20:27 06...