实时荧光RT-PCR技术(RT-qPCR)利用荧光标记探针对扩增产物量进行实时跟踪,再根据扩增曲线计算出起始模板量,即样本病毒载量。如图是利用RT-qPCR进行新冠肺炎病毒(SARS-CoV-2)载量测定的主要过程。请据图回答:(1)过程①中,RNA提取裂解液可同时灭活病毒,原因是 ___。采集到的样本要迅速进行病毒灭活处理,其目的是...
实时荧光RT-PCR可用于新型冠状病毒的核酸检测,RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA聚合酶链式扩增反应相结合的技术,其原理是:在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合,探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团,新链延伸过程中,DNA聚合酶会破坏探针,导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT-PCR进行核酸检测...
与双链 DNA 结合,荧光信号强度与双链 DNA数量相关。 实验前准备 试剂与耗材: 特异性 PCR 引物 总RNA Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit LightCycler® 480 SYBR Green I Master 仪器: LightCycler® 480 实时定量 PCR 仪 96 或 384多孔板等 2.实验操作流程 反转录反应 Q-PCR 扩增 三、实验步骤...
实时荧光定量PCR,简称 RT-QPCR, 属于 Q-PCR 的一种,目前该技术已得 到广泛应用,如:扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、SNP 分析等。荧 光定量 PCR 最常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法和 Taqman 水解探针的特异性方法。
实时荧光RT-PCR技术是将逆转录(RT)、PCR以及荧光标记等相结合的技术,是检测新型冠状病毒核酸序列最常用的方法。其具体的过程为:从样品中提取RNA→cDNA→PCR扩增→荧光检测。回答下列问题:(1)RT-PCR操作过程中,所需的酶有___。PCR过程中温度的控制至关重要,需要依次设置不同的循环温度参数:95℃-30s、55℃-45...
实时荧光定量RT -PCR技术需要在常规PCR基础上添加荧光染料或荧光探针,荧光染料能特异性掺入DNA双链中,从而发出荧光信号。在新冠病毒肺炎疫情期间,可以通过实时荧光定量RT-PCR技术进行核酸检测。下列相关叙述错误的是( )A. 图中的探针可能是利用荧光分子标记的新冠病毒独特的基因序列 B. 核酸检测是通过检测荧光信号来...
新冠病毒核酸检测时常用实时荧光RT一PCR技术。TaqMan探针为一小段可与目标序列互补的脱氧核苷酸单链,且5′端含一个荧光基团R,3′端含一个淬灭基团QPCR复性的过程中,TaqMan探针和目标序列结合,新链延伸时,在DNA聚合酶的作用下,荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。下列叙述错误的是( ) A. RNA不能作为PCR的模板,需...
【题目】实时荧光RT-PCR技术可快速检测新冠病毒的核酸,为疫情防控提供了有力保障。检测原理如图所示,探针是含荧光基团并有特定序列的DNA单链。下列说法错误的是(病毒RNA 逆转录单链DNA荧光探针杂交 DNA→^(φ^2+H_2)CONA (发出荧光A.逆转录和杂交DNA扩增所需的原料相同B.逆转录、扩增和分子杂交中碱基配对情况...
“实时荧光定量RT-PCR”是新冠疫情防控的一把利刃,通常在l～2h内即可得到检测结果。TaqMan探针是实时荧光定量RT-PCR技术中一种常用探针(如图1),其5末端连接荧光基团(R),3末端连接淬灭剂(Q)。当探针完整时,R发出的荧光信号被Q吸收而不发荧光。在PCR扩增过程中,当Taq酶遇到探针时会使探针水解而释放出游离的R和...