一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
什么是实时荧光定量PCR (RT-PCR,qPCR)? 实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)指的是在PCR进行的同时,对其过程进行监测的能力(即实时)。因此,数据可在PCR扩增过程中,而非PCR结束之后,进行收集。这为基于PCR的DNA和RNA定量方法带来了革命性的变革。在实时荧光定量PCR (qPCR)中,反应...
实时荧光定量PCR（RT-PCR）自发明以来的 30 多年里，聚合酶链式反应 (PCR) 已成为分子生物学家的主要技术。 其不可或缺的秘诀在于其简单性和多功能性。 该技术的许多变体已经被开发出来； 其中之一，实时PCR，已成为基因表达定量研究、确定临床样本中的病原体载量以及检测 SNP/突变的首选方法。什么是实时 PCR？...
为了最高效地设计用于实时荧光定量PCR的引物和探针,我们强烈建议您使用引物设计软件。大多数引物设计程序均包含了可调节的参数以设计最佳的引物和探针。这些参数涉及了引物/探针的Tm值、互补性、二级结构以及扩增子大小等重要因素。另外还建议您限制连续的重复核酸数目。当设计用...
此外，一种将 RT-PCR 与 qPCR 相结合的技术，逆转录定量实时 PCR(Reverse transcription quantitative ...
一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
实时定量反转录聚合酶链式反应(Real-Time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chn Reaction,简称实时定量RT-PCR)是一种在DNA扩增过程中,通过荧光信号实时监测反应产物量的变化,从而得到起始模板量的分析方法。这种技术结合了反转录(RT)和聚合酶链式反应(PCR)两个过程,使得RNA模板也能进行定量分析。 实时定量RT...
RT—PCR:以mRNA为模板,反应体系中,加入反转录酶,RNA经过反转录酶反转录为cDNA,再以cDNA为模板进行的PCR反应称为RT-PCR。RT—PCR具有很高的敏感性,可以用来分析不同组织或是相同组织不同发育阶段中mRNA表达状况的相关性. 实时定量PCR:是一种在反应体系中加入荧光集团,运用Taq酶的5’-3'外切核酸酶活性和荧光能量...
实时荧光定量PCR,简称 RT-QPCR, 属于 Q-PCR 的一种,目前该技术已得 到广泛应用,如:扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、SNP 分析等。荧 光定量 PCR 最常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法和 Taqman 水解探针的特异性方法。