一、常规PCR PCR是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,其中引物的好坏与PCR结果有密切关系。PCR不仅要求引物与靶DNA特异结合,还要求DNA聚合酶能对引物进行有效的延伸(图1)。 图1 PCR实验原理 ◆ 引物设计要遵循以下原则 ◆ 01.引物长度一般在15-30bp; 02.引物GC含量一般为40%-60%; 03.引物所对...
比如 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCB...
解析 建议到UCSC genome browser上看,那里每个基因的extron 用大写字母表示,而Intron用小写字母。比较直观。设计引物建议用软件,比较好的免费网页有Primer3. 至少要有一个引物是跨intron extron交界点。这样可以保证不会扩增残留的DNA。只扩增cDNA。反馈 收藏 ...
两步法的话，第一步就不用基因特异引物，直接用oligo dt引物（或者oligo dt+随机引物），反转录得到的整套cDNA模板，也就包括了目的基因模板。第二步，再用Primer5.0设计特异引物扩增就行了。
解析 设计引物的时候,选择扩增跨内含子的片段来设计引物.或者提取RNA的时候用专门的RNA提取试剂盒.或者提取RNA后加入一定DNA酶,消化一段时间再纯化,反转录.结果一 题目 利用RTPCR获得目的基因时,如何鉴定其中有无DNA污染?设计一套实验排除DNA造成的污染 答案 设计引物的时候,选择扩增跨内含子的片段来设计引物. ...
0或者primer premier 5.0破解版是常用的引物设计软件。至于RTPCR引物，研究过的基因最好用报导过的引物...
请问，T-DNA插入是在ATG前面15 bp处，位于启动子区域，怎样设计RT-PCR的引物来鉴定突变体？我自己想的...
一般是把退火温度调些。如果退火温度调高了，还是有很多杂带，则说明你的引物特异性不强，需要再重新设计引物。你指的DNA污染是指什么？提RNA时在最后一步时，加上DNA酶，保温一段时间，PCR时，可以做空白对照，如果边空白对照都能扩增出条带，则说明你的试剂盒或是蒸馏水污染了 ...
(7)最后将选定的引物在NCBI进行特异性BLAST,再进行合成。 二、实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR) 实时荧光定量PCR,即第二代PCR,在聚合酶链反应“变性-退火-延伸”扩增过程的“延伸”段,对荧光探针标记的靶基因荧光信号进行实时采集,通过3个参数(荧光信号-Ct值-靶基因的起始浓度)间的关系,最终...
primer premier 5.0，设计好引物后，去NCBI网站BLAST一下，如果没有非特异扩增，说明能用 ...