解析 建议到UCSC genome browser上看,那里每个基因的extron 用大写字母表示,而Intron用小写字母。比较直观。设计引物建议用软件,比较好的免费网页有Primer3. 至少要有一个引物是跨intron extron交界点。这样可以保证不会扩增残留的DNA。只扩增cDNA。反馈 收藏 ...
解析 设计引物的时候,选择扩增跨内含子的片段来设计引物.或者提取RNA的时候用专门的RNA提取试剂盒.或者提取RNA后加入一定DNA酶,消化一段时间再纯化,反转录.结果一 题目 利用RTPCR获得目的基因时,如何鉴定其中有无DNA污染?设计一套实验排除DNA造成的污染 答案 设计引物的时候,选择扩增跨内含子的片段来设计引物. ...
一、常规PCR PCR是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,其中引物的好坏与PCR结果有密切关系。PCR不仅要求引物与靶DNA特异结合,还要求DNA聚合酶能对引物进行有效的延伸(图1)。 图1 PCR实验原理 ◆ 引物设计要遵循以下原则 ◆ 01.引物长度一般在15-30bp; 02.引物GC含量一般为40%-60%; 03.引物所对...
比如 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCB...
两步法的话，第一步就不用基因特异引物，直接用oligo dt引物（或者oligo dt+随机引物），反转录得到的整套cDNA模板，也就包括了目的基因模板。第二步，再用Primer5.0设计特异引物扩增就行了。
建议到UCSC genome browser上看，那里每个基因的extron 用大写字母表示，而Intron用小写字母。比较直观。设计引物建议用软件，比较好的免费网页有Primer3. 至少要有一个引物是跨intron extron交界点。这样可以保证不会扩增残留的DNA。只扩增cDNA。
primer premier 6和oligo结合使用
如题 我要做的是一个未知基因， 依据已知物种的 对比设计出了引物，做了RT-PCR获得了大约500bp的片段...
解答一 举报 设计跨内含子的引物,扩增看看是不是有长度符合包含内含子的产物,如果有,就是有DNA污染了. 解析看不懂?免费查看同类题视频解析查看解答 相似问题 利用RTPCR获得目的基因时,如何鉴定其中有无DNA污染?设计一套实验排除DNA造成的污染 关于DNA的粗提取和鉴定的问题 DNA粗提取和鉴定的实验问题 特别推荐 ...
如果电泳结果出现很多杂带（包含目的带），则说明特异性不强，需要重新做PCR，把退火温度重新设定一下，一般是把退火温度调些。如果退火温度调高了，还是有很多杂带，则说明你的引物特异性不强，需要再重新设计引物。你指的DNA污染是指什么？提RNA时在最后一步时，加上DNA酶，保温一段时间，PCR时，...