Sanger法(双脱氧链终止法)是核酸序列测定的一种方法。实验所用的反应体系包括待测序的单链DNA模板、引物、四种脱氧核苷酸(其中一种用放射性同位素标记)和DNA聚合酶。整个实验分为四组,每组按一定比例加入一种底物类似物(ddATP、ddGTP、ddCTP、d...
图1 双脱氧测序法。单链DNA 片段与引物复性后进行聚合反应(步骤1) , 在Sanger 法中(右图), 加人Klenow 酶和放射标记的dATP (步骤2) ,然后,分成4 份进行反应(步骤3),分别加入其余的3 种dNTP 及一种ddNTP (步骤4) 。DNA 的合成进行 以产生更高分子质量的DNA, 这种DNA 链滞留在测序胶的顶部无法分辨。测序...
方法:将待测序的单链DNA的模板、引物、四种单脱氧碱基和DNA聚合酶分成四管,在四管反应系统中分别按比例引入四种双脱氧碱基,只要双脱氧碱基掺入链端,该链就停止延长,链端掺入单脱氧碱基的片段可继续延长。如此每管反应体系中便合成以共同引物为5端,以双脱氧碱基为3端的一系列长度不等的核酸片段。反应终止后,分...
20世纪70年代, Fred sanger发明了双脱氧终止法对DNA进行测序。其原理如图,在4个试管中分别加入4种脱氧核苷三磷酸(dNTP)和1种双脱氧核苷三磷酸(ddNTP);ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点,并终止DNA片段的延伸。在4个试管中DNA链将会分别在A、G、C及T位置中止,并形成不同长度的DNA片段。这些片段随后可被电泳分开...
20世纪70年代,科学家发明了双脱氧终止法对DNA进行测序。其原理如图,在4个试管中分别加入4种脱氧核苷三磷酸(dNTP)和1种双脱氧核苷三磷酸(ddNTP);ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点,并终止DNA片段的延伸。在4个试管中DNA链将会分别在A、G、C及T位置中止,并形成不同长度的DNA片段。这些片段随后可被电泳分开并...
【第108题】双脱氧测序法对患者DNA的测序 - 周浩老师于20240908发布在抖音,已经收获了4.5万个喜欢,来抖音,记录美好生活!
答:双脱氧末端终止法测定DNA一级结构是采用核苷酸链终止剂——2’,3’-双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3’,5’磷酸二酯键所需要的3’-OH,一旦渗入到DNA中,此DNA链就不能进一步延长(1分)。根据碱基配对原则,每当DNA聚合酶需要dNMP渗入到正常延 长到DNA链中,就有两种可能性,一是深入ddNTP,结果导致...
双脱氧核苷酸测序法(也叫Sanger法)是DNA测序的第一代方法。双脱氧核苷酸在2、3号位碳上都脱氧,而磷酸二酯键的形成需要3号碳上提供羟基,双脱氧核苷酸没有这个羟基,所以一旦DNA子链加入某一个双脱氧核苷酸(如鸟嘌呤双脱氧核苷酸简写ddGTP)则聚合反应终止。在人工合成体系中,有适量的GCGATGACTAG的单链模板、某一种双...
过程:测序时提成四个反映,每个反映除上述成分外分别加入2,3-双脱氧A,C,G,T核苷三磷酸,然后进行聚合反映. 在第一种反映物中,ddATP会随机地代替dATP参加反映一旦ddATP加入了新合成DNA链,由于其3位羟基变成了氢,因此不能继续延伸.因此第一种反映中所产生DNA链都是到A就终结了;同理第二个反映产生都是以结尾;第...