方法:将待测序的单链DNA的模板、引物、四种单脱氧碱基和DNA聚合酶分成四管,在四管反应系统中分别按比例引入四种双脱氧碱基,只要双脱氧碱基掺入链端,该链就停止延长,链端掺入单脱氧碱基的片段可继续延长。如此每管反应体系中便合成以共同引物为5端,以双脱氧碱基为3端的一系列长度不等的核酸片段。反应终止后,分...
Sanger法(双脱氧链终止法)是核酸序列测定的一种方法。实验所用的反应体系包括待测序的单链DNA模板、引物、四种脱氧核苷酸(其中一种用放射性同位素标记)和DNA聚合酶。整个实验分为四组,每组按一定比例加入一种底物类似物(ddATP、ddGTP、ddCTP、d...
1 ) Sanger 双脱氧链终止法进行 DNA 测序的原理是: 双脱氧核糖核苷三磷酸( ddNTP )不会与正常的脱氧核糖核苷三磷酸( dNTP )形成磷酸二酯键,从而链的随机终止;建立 4 个系统,就可得到 4 个套组( nested sets );在一个胶板上同时电泳,就可读出模板链的互补链的顺序。 ( 3 分) ( 2 )测序的步骤:( 3...
Sanger双脱氧链终止法的最大特点是引入了双脱氧核苷三磷酸(2’,3’-ddNTP)作为链终止剂。(1’)2’,3’-ddNTP与普通的dNTP不同之处在于前者的脱氧核糖的3ˊ位又少了个羟基。它可以在DNA聚合酶的作用下和多核苷酸链的3’羟基形成磷酸二酯键,但却不能再与下一个核苷酸缩合,结果使得多核苷酸链的延伸终止。(2...
简述Sanger“双脱氧链终止法”进行DNA测序的基本原理。【答案】:双脱氧链终止法测序的基本原理是:以待测DNA片段为模板,利用酶法合成与待测片段互补的DNA链。在正常的合成体系中,分别加入4种3'位缺少羟基的双
基因检测是指通过检测生物体中的DNA序列,以了解生物体基因状况的技术手段。Sanger双脱氧链终止法是DNA测序的基本方法,其原理是:核酸模板在核酸聚合酶、带有3′-OH末端的单链核苷酸引物、四种dNTP存在的条件下复制或转录时,如果在反应系统中分别引人单一种类的ddNTP(即2、3双脱氧核苷三磷酸,在脱氧核糖的3′位置缺少一...
A. DNA连接酶 B. T7DNA聚合酶 C. T4DNA聚合酶 D. Klenow大片段 相关知识点: 试题来源: 解析 正确答案:B,D 正确答案:B,D 解析:在双脱氧链终止法测序反应中,常使用失去5′→3′外切核酸酶活性的DNA聚合酶的Klenow大片段或T7DNA聚合酶,来催化合成待测DNA模板序列的新生互补链。 知识模块:生化专题反馈...
采用双脱氧链终止法进行 DNA 自动测序时,常用A.琼脂糖凝胶水平电泳。B.琼脂糖凝胶垂直电泳。C.聚丙烯酰胺凝胶毛细管电泳D.聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳。
人类基因组计划的目标是测定人类的DNA中碱基的排列顺序。测序的方法有多种,其中双脱氧链终止DNA测序法是一种通过向DNA复制体系中加入能够终止新链延伸的某种带标记的脱氧核苷酸类似物,得到长度不同的脱氧核苷酸链,再通过电泳条带(按相对分子质量大小排列)读出对应碱基的位置的方法,操作方法如图所示。下列叙述错误的是(...