研究构建了一种基于表面展示技术的高通量酵母双杂交筛选体系,通过整合诱变文库构建、自动化筛选及多维度验证流程,显著提升了蛋白互作分析的效率和灵敏度。利用威尼德电穿孔仪优化酵母转化效率,结合某试剂介导的文库扩增技术,筛选通量提升至传统方法的5倍,检测灵敏度达10^−7 mol/L,适用于大规模药物靶点筛选和功能基因组学研究。
德泰生物拥有核蛋白及膜蛋白酵母双杂交双重体系，提供从酵母文库构建酵母文库筛选，点对点酵母双杂交验证一...
酵母双杂交筛库的实验思路是以诱饵为载体,筛选酵母双杂交文库,经过对阳性克隆的多重报告基因检测、DNA测序和BLAST比对分析,确定互作蛋白。▼应用场景最有价值的应用是用BD-X筛选由AD-Y构成的cDNA文库,以获得新的蛋白质之间的相互作用,并分析研究新的基因。用于鉴定新的蛋白质相互作用,证实可疑的相互作用,确定相互作用...
在基础研究中,科学家利用该技术绘制了酵母蛋白质相互作用图谱,鉴定出超过4500对相互作用;在药物开发领域,通过筛选化合物库寻找能破坏致病蛋白相互作用的抑制剂;农业生物技术中用于研究植物抗病蛋白与病原体效应蛋白的互作机制。衍生技术如逆双杂交系统可用于筛选破坏蛋白质相互作用的分子,而膜酵母双杂交系统则拓展了对跨...
「酵母双杂交筛选」 酵母双杂交(Yeast Two-Hybrid, Y2H)是一种研究细胞内蛋白质之间相互作用的经典分子生物学技术。最早是1989年由Fields等在研究真核生物基因转录调控中提出并初步建立的。随着分子生物学的发展,在酵母双杂交的基础上又建立了酵母单杂交、膜体系酵母双杂交、酵母三杂交等多项技术,用于蛋白-蛋白、蛋白...
酵母双杂交筛选简介和流程 实验原理 蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础，研究反式作用因子之间的相互作用对真核基因转录调控影响的实验。很早就已知道，转录活化蛋白可以和 DNA 上特异的序列结合而启动相应基因的转录反应。这种DNA 结合与转录激活的功能是由转录活化蛋白上两个相互独立的结构域即 DNA 结合...
一、酵母双杂交系统介绍 酵母双杂交系统(Yeast Two-Hybrid System)是一种基于酵母细胞的遗传学技术,广泛应用于基因表达调控、蛋白-蛋白相互作用及信号传递等方面的研究中。 二、双杂交蓝白斑筛选原理 双杂交蓝白斑筛选原理是基于酵母菌株的His3和LacZ两个基因的筛选原理。在酵母细胞中,如果两个不同蛋...
核体系酵母双杂mating SOP 实验流程总览实验材料 培养基 SD/–Trp固体培养基 SD/-Trp液体筛选培养基 SD/–Leu固体培养基 SD/–Trp/X-α-Gal/AbA固体筛选培养基 SD/–Trp/X-α-Gal固体筛选培养基 SD/–Leu/–Trp固体筛选培养基 SD/–Leu/–Trp/–His/X-α-Gal/AbA固体筛选培养基 SD/–Leu/–Trp/–...
酵母双杂交技术是在研究酵母转录因子GAL4性质的基础上建立的蛋白互作研究技术,是在真核酵母细胞内进行的,尽可能保持蛋白天然的折叠状态,类似于在体内生理状态下的情况进行融合体蛋白之间相互作用。 具有明敏度高、效应多级放大功能、实验步骤成熟等特点,被广泛应用于生物科学领域的蛋白与蛋白互作分子机制研究。分为核体系...
酵母双杂交技术是筛选能与已知蛋白互作的蛋白质的方法,其主要原理如图1。黄瓜花叶病毒(CMV)可侵染200多种植物,病毒的外壳蛋白(CMVCP)直接参与病毒的细胞间转移、症状表现等。研究人员利用酵母双杂交技术,从CMV感染的番茄叶片cDNA文库中筛选出CMVCP互作蛋白基因,图2为构建CMVCP诱饵载体(能表达出BD-CP融合蛋白)的流程...