酵母双杂交技术是筛选能与已知蛋白互作的蛋白质的方法,其主要原理如图1。黄瓜花叶病毒(CMV)可侵染200多种植物,病毒的外壳蛋白(CMVCP)直接参与病毒的细胞间转移、症状表现等。研究人员利用酵母双杂交技术,从CMV感染的番茄叶片cDNA文库中筛选出CMVCP互作蛋白基因,图2为构建CMVCP诱饵载体(能表达出BD-CP融合蛋白)的流程...
酵母双杂交系统是鉴定和验证蛋白质互作的最常见和最直接的方法。该系统最大的优点是待测蛋白在实验过程中能够保持天然构象,从而提高了检测的准确性和灵敏度。实验室前期研究发现OsCRK5参与了水稻干旱胁迫反应,但是具体的分子机制尚不清楚。 近日,...
酵母双杂合系统筛选相互作用的蛋白一基本原理酿酒酵母Saccharomyces cerevisae的GAL4蛋白881个氨基酸99000 dal是半乳糖降解酶半乳糖激酶半乳糖转移酶半乳糖异构酶基因gal的转录激活因子。它由两个物理上可以分开功能上独立的结构域组成即N端1-147氨基酸的DNA结合结构域DNA binding domain BD和C端 768-881氨基酸的转录...
互作蛋白以无自激活活性的GmDREB5蛋白73~226位氨基酸区段为诱饵,采用酵母双杂交系统筛选干旱处理5 h大豆cDNA文库。结果发现:一个互作蛋白含有保守的TPR(Tetratricopeptide repeat)结构域,与拟南芥的TPR蛋白仅有14%的相似性,说明其可能是一类新的大豆TPR蛋白,将其定名为GmTPR1;表达特性分析表明,GmTPR1基因受干旱、低温...
为客户构建指定的酵母双杂交基因文库。由客户提供cDNA或组织、细胞等。 服务完成时提供详细的实验报告以及文库 2.酵母双杂交技术从cDNA文库中筛选相互作用蛋白: 服务内容: I诱饵质粒的构建及自激活作用和蛋白毒性检测 I组织cDNA文库的构建(或客户提供) I酵母接合效率的计算及接合后初步阳性克隆筛选的统计 I阳性克隆文库...
酵母双杂交筛选系统(蛋白/蛋白互作) 规格 酵母双杂交技术是在研究酵母转录因子GAL4性质的基础上建立的蛋白互作研究技术,是在真核酵母细胞内进行的,尽可能保持蛋白天然的折叠状态,类似于在体内生理状态下的情况进行融合体蛋白之间相互作用。 请选择 服务详情 (一)核体系双杂筛选: 通过转录活化蛋白结合DNA上特异的序列...
用含有pGBKT7-C24-2诱饵质粒的AH109酵母菌株作为受体菌制备感受态,将文库质粒pGADT7-水稻稻穗cDNA转入其中,涂SD-TLH、SD-TLHA筛选平板。 筛库结果:筛库的SD-TLH单菌落生长,所以从SD-TLH平板上挑取了96个克隆进行PCR验证。 三:酵母阳性克隆鉴定与测序比对 ...
一、酵母双杂交筛选 pGBKT-7-FvCAMTA1的互作蛋白 将诱饵质粒与cDNA文库混合进行杂交转化后，涂布于三缺培养基 SD/-Trp/-Leu/His 上进行酵母双杂筛选；将直径大于2mm 且生长健康的单菌落全部转接至增大筛选压力20mg/L 浓度Aba的QDO/X/A 平板上，30℃倒置培养3d，共获得 54个酵母单克隆（图7）。将筛选出的...
如果酵母能生长的话就接着做一个-gal。所以有的人同时转化两种菌种。这样就完全可以确定两蛋白是否有作用了。 (实验室一般采用在21步之后涂一个二缺板,将上面长出的克隆用水或相应的缺陷培养基打散后分5到6个梯度滴在相应的三缺或四缺培养基上进行筛选培养,每个梯度稀释10倍。是否互作主要是看实验组跟阴性对照...
构建高质量文库是筛选互作蛋白的前提和保障。该研究所构建番茄cDNA酵母双杂交文库容量、插入片段大小及阳性率检测结果均符合文库筛选的要求。 笔者进一步以番茄Pti4为诱饵蛋白进行互作蛋白文库筛选,初步获得了6个可能与Pti4互作的转录因子。它们涉及植物成熟、生长发育、环境胁迫应答等多种调控途径,这也与Pti4在番茄中的...