酵母双杂交筛库的实验思路是以诱饵为载体,筛选酵母双杂交文库,经过对阳性克隆的多重报告基因检测、DNA测序和BLAST比对分析,确定互作蛋白。▼应用场景最有价值的应用是用BD-X筛选由AD-Y构成的cDNA文库,以获得新的蛋白质之间的相互作用,并分析研究新的基因。用于鉴定新的蛋白质相互作用,证实可疑的相互作用,确定相互作用...
一、核蛋白酵母双杂交文库筛选技术服务(可以选择使用invitrogen的pDEST22和clonetech的pGADT7两套系统进行筛选,可以使用预制商业化文库或者本公司定制构建的酵母杂交文库) 1.实验原理 蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础,研究反式作用因子之间的相互作用对真核基因转录调控影响的实验。很早就已知道,转录活化蛋白...
一、核蛋白酵母双杂交文库筛选技术服务(可以选择使用invitrogen的pDEST22和clonetech的pGADT7两套系统进行筛选,可以使用预制商业化文库或者本公司定制构建的酵母杂交文库) 1.实验原理 蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础,研究反式作用因子之间的相互作用对真核基因转录调控影响的实验。很早就已知道,转录活化蛋白...
“自1989年Field等人建立了基于酵母的细胞内检测蛋白相互作用的系统以来,酵母双杂交系统已经越来越多的应用于鉴定新的蛋白与蛋白相互作用,鉴定蛋白级联底物以及鉴定突变对蛋白与蛋白结合的影响等。有文献统计,目前已知的蛋白质相互作用至少有一半是通过酵母双杂交实验发现的!” 而文库筛选结果直接由文库质量的好坏所决定,...
为客户构建指定的酵母双杂交基因文库。由客户提供cDNA或组织、细胞等。 服务完成时提供详细的实验报告以及文库 2.酵母双杂交技术从cDNA文库中筛选相互作用蛋白: 服务内容: I诱饵质粒的构建及自激活作用和蛋白毒性检测 I组织cDNA文库的构建(或客户提供) I酵母接合效率的计算及接合后初步阳性克隆筛选的统计 I阳性克隆文库...
在进行酵母双杂交文库筛选过程中，首先需要将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域进行融合，构建出诱饵质粒。这个步骤是筛选过程的基础，通过将特定的基因与酵母细胞的蛋白质结合域进行连接，使得该基因在酵母细胞中能够表达并发挥其功能。接下来，将构建好的诱饵质粒转化到缺乏报告基因启动子的...
为阐明Q基因对小麦面包品质影响的机制，研究者以Q蛋白为诱饵通过酵母杂交筛选开花后14天小麦种子文库，结果共筛选到6个与Q蛋白互作的转录因子，其中1个为SPA。进一步研究发现，Q与SPA间的相互作用弱于Q蛋白与SPA的互作强度，且Q到Q的突变增强了SPA对LMW-GS基因表达的激活作用。此外，通过分析和 WT的转录组数据，...
酵母双杂交文库筛选ORF1的相互作用蛋白服务案例 一、试剂、耗材(略)仪器设备(略)试剂及配制 (略)二、诱饵载体构建pGBKT7- ORF1的构建与鉴定(此步骤为常规的实验方法,可以通过酶切、测序等方法鉴定酵母杂交诱饵载体正确性,此处略)三、ORF1自激活检测3.1酵母转化反应将各种质粒转入受体菌AH109中,观察检测结果。 3.2...
1.酵母双杂交文库筛选:是指用一个或多个已知蛋白对一个或多个文库进行筛选。 2.用于酵母双杂交的基因克隆必须是该基因的编码序列(CDS)cDNA,全长或片段由客户自己决定,含有3’和5’非编码序列及Intron序列的均不能直接使用。 3.客户对自己提供待测基因克隆,需同时提供该克隆的DNA测序报告(包括DNA序列和峰图),...
酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的,研究活细胞内蛋白质相互作用,对蛋白质之间微弱的、 瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到,它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明,酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作,也可以用来研究高等植物...