免疫共沉淀(co-inmunoprecipitation, Co-IP or CoIP)是研究体内蛋白质-蛋白质相互作用以及建立蛋白间相互作用关系的有力工具,是经典的在生理条件下利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白、复合体,能够特异性富集所研究的目的蛋白及其结合蛋白的一项技术,是确定蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 Co-IP实...
D、从板上刮下细胞,把裂解液转移至1.5mL EP管中,置于冰上,在冰上进行3次超声破碎,每次5s; E、在4℃条件下,14000g离心10min,将上清液转移到新EP管中,向每个分组中提取80μL上清液作为对应Co-IP的input组; 2)免疫沉淀 A、向剩余的细胞裂解液中添加5μL Protein A和5μL Protein G,4℃冰箱内旋转孵育30...
百泰派克标准Co-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析法的一般程序如下: • 制备蛋白质混合物,细胞裂解液或组织提取物 • 用抗体结合的亲和珠孵育蛋白质混合物,细胞裂解物或组织提取物 • 通过多个洗涤步骤清除未结合的蛋白质 • 通过SDS-PAGE,蛋白质印迹或质谱(MS)分析检测相互作用蛋白 ...
免疫共沉淀法操作步骤..免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。原理如果细胞内两蛋白(A、B)有直接或
免疫共沉淀(co-inmunoprecipitation, Co-IP 或 CoIP)是研究蛋白质间相互作用的关键工具，能够从细胞中捕获靶蛋白及其互作蛋白。这一技术在生理条件下利用抗体富集所研究的目的蛋白及其结合蛋白，是确定蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。Co-IP实验涉及以下步骤：首先，以细胞内源性靶蛋白为诱饵...
免疫共沉淀(Co-IP)是基于免疫学原理研究蛋白质相互作用的经典方法,通过使用靶蛋白特异性抗体来间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白,从而识别生理相关的蛋白-蛋白相互作用,并可通过质谱技术来鉴定新的相互作用蛋白质。 SILAC(Stable isotope labeling using amino acids in cell culture)细胞培养条件下稳定同位素标记技术是一...
Co-IP的结果需要与其他验证方式进行比较和确认。其他常用的验证方法包括双杂交、荧光共定位、GST pull-down等。这些方法可以提供互补的信息,帮助确定蛋白质相互作用的可靠性。 如果Co-IP验证出两个蛋白质相互作用,但其他验证方式却没有检测到这种互作,可能有以下几个原因:首先,Co-IP可能存在假阳性结果,即非特异性结...
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CO-IP是用于检测或探究蛋白与蛋白之间相互作用的实验,属于IP实验的扩展,在样品溶液中,捕获和纯化通过天然相互作用及靶标结合的其他大分子蛋白,基于抗原抗体的特异性免疫结合,以饵蛋白为诱饵蛋白,通过饵蛋白抗体捕获,磁珠吸附结合,进而将饵蛋白结合的互作蛋白捕获得到,纯化定量定性分析。 实验操作步骤: 1.样本准备 组织...