免疫荧光实验方法 (Immunofluorescence, IF) 简介 免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗...
FITC荧光强度极易受到pH影响,且易淬灭,在荧光染料选择中,常用AlexaFluor488或者CF488A替代。 在进行双重或多重免疫荧光染色时,一般先通过ThermoFisher等网站上的荧光光谱查看器进行预选择,不同荧光的激发波长或发射波长尽量无交叉,防止串色,影响试验结果的准确性。 4. 抗体保存 防止荧光抗体失活、污染以及荧光染料的...
免疫细胞化学/免疫荧光 (ICC/IF) 是一种使用荧光抗体或染料来检测细胞内靶抗原的技术。本实验方案详述了使用 Cytospin™ 离心对悬浮细胞进行 ICC/IF 的流程。一般流程 1. 用聚乙烯亚胺或多聚赖氨酸涂覆盖玻片，在室温下放置 1 小时。2. 用无菌水充分漂洗盖玻片 3 次，每次 1 小时。3. 充分干燥盖玻...
今天,咱们好好的了解一下免疫荧光实验~ 实验原理 免疫荧光(Immunofuorescence, IF)的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来标记目的蛋白,主要包括直接法和间接法。直接法是目的蛋白和带有荧光基团的一抗结合,间接法是目的蛋白和一抗结合,然后一抗再与带有荧光基团的二抗结合,通过荧光显微镜可观测到荧光,进而观测到...
专业术语免疫荧光经常与免疫细胞化学和免疫组织化学混淆。这三个术语经常互换使用,这可能会导致您在购买用于显微实验的抗体时感到困惑。 免疫荧光(IF) 免疫荧光(IF)是指所使用的检测方法(即使用荧光染料使感兴趣的标记可视化),与所使用的样本类型无关。IF可以进一步分为两类:...
免疫荧光|文献解读+实验步骤+PS作图免疫荧光(IF)是最常见的免疫学、生物化学、细胞生物学的一项技术,通过不同抗体分子与示踪剂的结合,我们能很清晰的看出目的蛋白在细胞内的表达情况。 本条笔记从文献解读到实验步骤再到最终用photosh - poppy(读博版)于20240629发
IF实验 蛋白亚细胞定位和定量分析 一、细胞培养 荧光显微镜对于直接用培养皿拍摄都没有什么压力,不过依然更建议做爬片,不仅效果更好而且更适合拍共聚焦,封片也可以冷冻保存。 1 爬片用灭菌的超纯水清洗和浸泡。 2 自然干燥了之后放在紫外下照射至少1个小时以上。爬片之前经过高温灭菌的可以不需要这么久。
免疫荧光(IF)是一种基于抗原-抗体特异性反应,通过荧光标记来检测和定位细胞或组织中特定抗原(或抗体)的高灵敏度技术。此技术不仅在生物医学研究领域有着广泛的应用,还在临床诊断中扮演着重要角色。 基本原理与操作步骤 标记过程:在这一步骤中,选择适当的荧光色素至关重要,因为它必须既不影响抗原-抗体的活性,也要有...
随着研究的进行,你作出了一个假设,但得需要用免疫荧光(IF)来证实。接下来你需要作出一个选择:选择哪个抗体来获得可靠的IF结果呢?如何确认图像是否准确报告了靶标的位置? 一抗,是IF实验的一个关键组分,其性能会直接影响实验结果的质量。一个抗体在蛋白印迹 (WB) 实验中能特异性检测到条带,并不足以保证其也能在...
在免疫荧光 IF(Immunofluorescence)实验中,细胞是否一定要进行固定和通透是一个关键的技术考量点。 固定,是免疫荧光 IF 实验中至关重要的一个步骤。通过固定细胞,可以有效地将细胞的结构和蛋白质等生物分子稳定在原位,防止其在后续的操作过程中发生移位或降解。固定能够保持细胞形态的完整性,使得我们在显微镜下观察时能...