免疫荧光实验方法 (Immunofluorescence, IF) 简介 免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗...
FITC荧光强度极易受到pH影响,且易淬灭,在荧光染料选择中,常用AlexaFluor488或者CF488A替代。 在进行双重或多重免疫荧光染色时,一般先通过ThermoFisher等网站上的荧光光谱查看器进行预选择,不同荧光的激发波长或发射波长尽量无交叉,防止串色,影响试验结果的准确性。 4. 抗体保存 防止荧光抗体失活、污染以及荧光染料的...
免疫荧光(IF)是指所使用的检测方法(即使用荧光染料使感兴趣的标记可视化),与所使用的样本类型无关。IF可以进一步分为两类:直接法和间接法。 直接IF使用直接与荧光染料偶联的单一抗体来检测感兴趣的靶标。间接IF使用两种抗体来检测感兴趣的目标。结合靶标的一抗是未偶联的,...
免疫细胞化学/免疫荧光 (ICC/IF) 是一种使用荧光抗体或染料来检测细胞内靶抗原的技术。本实验方案详述了使用 Cytospin™ 离心对悬浮细胞进行 ICC/IF 的流程。一般流程 1. 用聚乙烯亚胺或多聚赖氨酸涂覆盖玻片，在室温下放置 1 小时。2. 用无菌水充分漂洗盖玻片 3 次，每次 1 小时。3. 充分干燥盖玻...
实验原理 免疫荧光(Immunofuorescence, IF)的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来标记目的蛋白,主要包括直接法和间接法。直接法是目的蛋白和带有荧光基团的一抗结合,间接法是目的蛋白和一抗结合,然后一抗再与带有荧光基团的二抗结合,通过荧光显微镜可观测到荧光,进而观测到目的蛋白。
免疫荧光 实验过程 免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透(或称为透化)、封闭、抗体孵育及荧光检测等。 细胞片制备(通俗的说法是细胞爬片)是免疫荧光实验的第一步,细胞片的质量对实验的成败至关重要,原因很简单,如果发生细胞掉片,一切都无从谈起。这一步关键的是玻片(Slides or Coverslips)的处理以及...
IF实验 蛋白亚细胞定位和定量分析 一、细胞培养 荧光显微镜对于直接用培养皿拍摄都没有什么压力,不过依然更建议做爬片,不仅效果更好而且更适合拍共聚焦,封片也可以冷冻保存。 1 爬片用灭菌的超纯水清洗和浸泡。 2 自然干燥了之后放在紫外下照射至少1个小时以上。爬片之前经过高温灭菌的可以不需要这么久。
四、免疫荧光染色实验步骤 1. 冰冻切片固定:切片从冰箱取出复温20-30min,置于4%多聚甲醛固定30min,于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。 2. 抗原修复:组织切片置于盛满EDTA 抗原修复缓冲液(PH6.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。大火3min,停火10min, 转为低火3min, 此过程中应防止缓冲液...
免疫荧光|文献解读+实验步骤+PS作图免疫荧光(IF)是最常见的免疫学、生物化学、细胞生物学的一项技术,通过不同抗体分子与示踪剂的结合,我们能很清晰的看出目的蛋白在细胞内的表达情况。 本条笔记从文献解读到实验步骤再到最终用photosh - poppy(读博版)于20240629发
免疫荧光技术的实验步骤包括细胞准备、固定和通透处理、抗体孵育、荧光检测等。在实验过程中,需要注意以下几点: 抗体选择:选择与目标蛋白高度特异性结合的抗体,并确保一抗和二抗的种属匹配,避免交叉反应。 荧光染料选择:根据实验要求选择合适的荧光染料,考虑其激发和发射波长,以确保荧光信号可以被检测设备有效捕捉。