在进行免疫荧光实验时，需要注意以下几点：l 样本处理：确保样本处理得当，以保持其结构和功能完整性。l 抗体选择：选择合适的抗体，以提高实验的特异性和灵敏度。l 孵育条件：控制孵育温度和时间，以保证抗体与目标蛋白充分结合。l 洗涤步骤：彻底洗涤样本，以减少背景干扰。l 显微镜观察：调整显微镜参数，以获得清晰的...
然后用PBS浸洗3次,每次5分钟。 二抗孵育:加适当稀释的荧光素标记二抗,使其覆盖细胞,置于黑色湿盒内室温孵育30分钟以上。然后用PBS浸洗3次,每次5分钟。 封片:滴加抗荧光衰减封片剂封片。 观察:在荧光显微镜下观察结果。通过以上步骤,你可以利用免疫荧光染色技术来显示目标蛋白在细胞中的分布和定位。0 8 发表评论 发...
1️⃣1️⃣ 一抗孵育:将一抗与样本结合。 1️⃣2️⃣ 二抗孵育:将标记有荧光的二抗与一抗结合。 1️⃣3️⃣ DAPI染色:对细胞核进行染色,便于观察。 1️⃣4️⃣ 观察:在荧光显微镜下观察并记录结果。🔍 通过这些步骤,我们可以对样本进行深入的免疫荧光分析,了解其内部的抗原分布和...
间接免疫荧光试验的主要步骤包括制备样品、固定、通透、封闭、以及一抗和二抗的孵育和最后的激光共聚焦拍照。 1. 细胞准备 将细胞接种于加有爬片的24孔板中,待细胞长到合适的密度进行样品的处理。密度太大,会造成细胞过于拥挤,形态不佳且边界不清,并且导致染色背景过深。如果细胞过少会导致细胞活性不佳,从而易发生...
免疫荧光(Immunofluorescence):简称IF,与western blotting一样,也是根据抗原抗体反应的原理,将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体或抗原上,与其相应的抗原或抗体结合后,在荧光显微镜下进行观察,从而确定抗原或抗体的性质和定位,包括直接法和间接法。 一、实验步骤 ...
免疫荧光实验操作步骤：一、细胞准备：对单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次；对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm,5min）2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。二、固定和透化 1. 在...
图4：免疫荧光步骤包括细胞固定和通透，封闭，孵育一抗，二抗等 ➤IF操作步骤 样本前处理-细胞样本 1.洗涤：弃去培养基，在细胞上缓慢加入常温TBS，清洗2次，每次5秒；2.固定：在细胞上覆盖 4%中性甲醛固定液（TBS缓冲液配制），置于4℃，固定15min；固定液需足量；3.洗涤：去除固定液，使用4℃预冷的TBS...
一、准备细胞样本在进行免疫荧光实验前，需要准备所需的细胞样本。可以使用常规的细胞培养技术，将细胞种植在适合的基质上生长，如盖玻片、载玻片或微孔板等。确保细胞贴壁生长，以便后续的操作。二、细胞固定固定细胞是免疫荧光实验中的关键步骤之一，可以有效地将细胞内的蛋白质固定在细胞内，使其不再移动。常用的固定...