组织免疫荧光超详细实验步骤+小tips.哈喽宝子们我是盛夏学姐最近很多同学在咨询组织的IF是怎么做的今天学姐带大家一起来学习一下并附上了学姐的实验结果图所有的要点都在👆👆啦大家学起来吧关🐷后私信答疑哦👇👇#科研 # - 医学盛夏学姐于20240624发布在抖
首先,将组织或细胞样本在室温下复温30分钟,以确保其恢复活性。 擦干并标记 🖌️ 使用组化笔在组织周围画圈,以便后续操作中区分组织和背景。 封闭2小时 🧪 将组织浸入含有10%正常二抗来源的血清和0.3% Triton的封闭液中,封闭2小时。这一步是为了减少非特异性结合。 去除封闭液 🚰 轻轻甩去封闭液,用纸巾或...
浸蜡主要是使石蜡进入组织,从而对组织起一定的支撑作用。一般石蜡熔点为56℃~58℃,所以浸蜡温度最好控制在其附近(不同石蜡的熔点略有差异)。为使浸蜡充分,一般也需要操作三次,如:石蜡Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各1h。 5.包埋 浸蜡结束后,将组织放入包埋盒中,加入熔化的石蜡,小心将其置于冷台上待其冷却凝固即可(注:取放...
1.抗原修复的方法和时间需要根据待检测的蛋白和组织类型进行调整,不同类型的抗原可能需要不同的修复条件。 2.抗体的选择需根据待检测蛋白的特性和背景来确定,需要进行充分的验证和比较才能确定最佳的抗体组合。 3.在进行免疫荧光检测时,需注意避免交叉反应和非特异性结合,通过相关对照和负对照实验可以进行验证。 4.显...
切片免疫荧光染色是一种常用的生物学实验方法,用于研究组织或细胞样本中的特定蛋白质标记。下面是一般的切片免疫荧光染色的具体步骤: 步骤一:取样 步骤二:切片 将固定的组织样本或细胞样本进行切片处理。可以使用切片刀或者切片机来获得薄片。切片的厚度往往是几微米到几百微米。切片完成后,可以将其放在载玻片上。 步骤...
以某组织样本为例: 一、准备免疫荧光所需的仪器与试剂: 生化培养箱、微波炉、生物组织摊烤片机、普通冰箱、盖玻片、载玻片、无水乙醇、3%双氧水、中性树胶、二甲苯、PBS缓冲粉、柠檬酸缓冲液 二、组织免疫荧光技术操作 1.60℃烤片30 min; 2.切片脱蜡至水:先将切片置于二甲苯中10 min,2次。然后依次在100%,95...
1、切片组织一直破碎怎么办? 有可能是组织脱水未完全,在冰冻切片时含有冰晶。切片时就会容易破碎。也有可能是冰冻切片机温度设置过低,而切片厚度又较厚就容易出现样本破碎。 2、双重染色时不同抗体添加顺序? 由于两种一抗种属来源不同,可把一抗混合使用。应注意...
组织样本需经石蜡包埋或冰冻切片处理,切片厚度控制在4-6微米,贴附于防脱载玻片上,置于37℃烘片机过夜增强附着力。 固定步骤使用4%多聚甲醛固定液覆盖样本表面,室温静置20分钟阻断生物活性。此过程需严格控制时间,过度固定可能导致抗原表位遮蔽。固定后使用PBS冲洗三次,每次5分钟,注意冲洗力度需均匀,避免样本脱落。
组织免疫荧光法 1.将待染组织切片置于65摄氏度恒温箱烤片1小时,脱蜡。 2.用1×PBS洗涤3次,每次5分钟。 3.在室温下,使用0.5% Triton X-100(PBS配制)通透10分钟。 4.用1×PBS洗涤3次,每次5分钟。 注意:步骤3和4用于检测细胞核抗原,细胞膜抗原可以直接跳过这一步骤。 5.进行抗原修复:使用柠檬酸盐缓冲液进...