RT-PCR就是把提取的RNA先逆转为cDNA,再以这个cDNA为模板进行pcr扩增的过程。 概念弄清楚了,接下来就是步骤了。 一:提取组织 我们提的是小鼠的脂肪,就是解剖之后把相应部位的脂肪剪下来就ok了。注意剪下来马上放液氮里冻存,取好的组织可以马上进行下一步实验,也可以冻着过几天再做。我师兄习惯隔天再做。但最...
可能问题出在标本的保存:一般四小时之内就应处理,分离出细胞 说的是套式PCR,可以在你的第一次PCR两个引物内,再设计一对引物进行第二次PCR就行了 如果你的第一次PCR刚好包括目的片段,那只好设计个更长的了 第二次的引物设计要求可以低一点 以50μl体系为例 引物各1μl 第一次PCR产物5μl 二次PCR和巢式...
24孔板就可以做了PCR了,但是具体的还要考虑你测的因子啊,20多个是没有问题的 分析总结。 pcr对扩增底物的量有要求不知道用多少孔的板子合适因为欲测的因子还比较多所以想尽量节省点板子的钱最多可以用多少孔的板子来做pcr用啊结果一 题目 做RT-PCR用板子种细胞,最多可以用几孔的板子?PCR对扩增底物的量有要求...
很确定地告诉你,我们是用96孔QIAGEN的mRNA turbocapture 提取后,做RT PCR的,细胞量3*10 5,你是...
我进行培养细胞的RT-PCR,按试剂盒说明提取总RNA后,用一步法进行RT-PCR,用内参β-actin的引物进行,产物长度315bp,反应条件为:50摄氏度30min,94摄氏度2min,94摄氏度30s,59摄氏度30s,72摄氏度1min(上述三步进行30次),72摄氏度7分钟,然后用产物进行电泳,结果两个样本(是两瓶细胞中分别提取的总RNA)在紫外仪下...
原位PCR 常用于研究疾病的发病机理、临床过程及病理的转归、分子生物学、细胞学、分子病理学及临床诊断领域等。 具体应用举例如下: 1.在样品中目标核酸含量低,原位杂交法灵敏度不够时,可采用原位 PCR 以高特异性、高灵敏度检出样品内的微量核酸; 2.确定目的基因或病毒的亚细胞定位; ...
原因很多,可能是提取过程中,RNA降解了,也可能是你的反转录不成功,扩不出来;也有可能是你的循环数太少了
一般动物细胞提取RNA很容易,RNA得率会比较高(除非经过处理细胞大量死亡的),cDNA量一般也较多,如果你想判断是否是cDNA量少,可以多做几个循环,条带会变亮。如果你的引物没有经过验证也有可能是引物设计不合理或者扩增条件不合适,这种情况下你只需要加上成熟扩增的内参基因平行试验即可。内参扩增好,...
我的实验检测的时候需要用到荧光探针,我看文献很多人都做过这些因子的RT-pcr检测.我想知道 比如说我想检测牛乳腺上皮细胞里面的IL-10因子,其荧光探针可以有什么data base查到么?毕竟做的人很多还是要到他们的文献里面找?还是要自己设计? 扫码下载作业帮搜索答疑一搜即得...
【题目】RT- PCR技术是确诊新冠肺炎患者的核酸检测手段(如图),该技术首先将病毒COVID-19的核酸通过逆转录形成DNA,然后以此DNA链为模板进行体外DNA复制,反应体系中加入的荧光基团会使目标DNA发光,从而被仪器检测到。下列叙述错误的是( ) A.病毒COVID- 19的遗传物质中含有尿嘧啶核苷酸 B.检测过程中需要核糖核苷酸和...