1. 测序方法 两种建库方法对应两种测序方法: 非链特异性测序方法(non-stranded RNA-seq protocol):得到的reads没有方向性,无法判断reads是属于Gene A还是属于Gene B (Antisense RNA)的。 链特异性测序方法(stranded RNA-seq protocol):得到的reads具有方向,可以根据reads方向判断reads是属于Gene A还是属于Gene B。
一、非特异性建库过程 反转录为单链cDNA,DNA聚合酶合成另一条链cDNA,得到双链的cDNA,然后纯化富集为cDNA文库 末端加A碱基,使得平末端转换为粘性末端,便于后续加引物和接头 片段大小选择 二、链特异性建库过程 谨记:dUTP链特异性建库属于RF 反转录为单链cDNA 在合成第二条链时,用dUTP代替dTTP,因此第二条DNA链上...